transwell总是没有细胞穿过
这个帖子发布于 8 年零 325 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
刚开始做transwell侵袭实验，做了两次但总是失败，完全没有看到细胞穿过，很是苦恼不知道为啥，我的操作步骤如下，请各位前辈指教：
1. 将冻存于－20度的matrigel 4度过夜，变成液态，使用前涡旋保证溶解均匀。用无血清培养基1：8稀释后，吸取50ul包被Transwell小室底部膜的上室面（以上均冰上操作）， 室温风干1小时并置于37度孵育6小时。
2. 水化基底膜：吸出小室中残余液体，每孔加入70ul无血清培养液，37℃，30min，吸去培养基。
3. 将对照组和处理组细胞前一天于无血清培养基中饥饿培养12-24h，消化后用PBS洗1-2遍，用无血清培养基重悬，调整细胞密度至5X105。
4. 加入100ul细胞悬液（5X104）至transwell小室，下室加入600ul含30�S的培养基，37度培养24h。
5. 弃去孔中培养液，用棉签轻轻擦掉凝胶及上层未迁移细胞；
6.PBS洗2遍，甲醇固定15min，PBS洗2遍。
附图是其中的两个照片，总是没看到细胞穿过，感谢指教！
20 30 1
