DIDE 双向荧光差异凝胶电泳

一、DIGE概述
         DIGE(双向荧光差异凝胶电泳,Two-dimensional fluorescence difference in gel electrophoresis,2D-DIGE)，是在传统双向电泳的基础上发展而来的新型蛋白质组学定量技术，其分离蛋白的基本过程与传统双向电泳一致。但DIGE使用三种荧光染料（Cy2, Cy3和Cy5）标记不同组别的蛋白，并在同一张凝胶上对标记好的三组蛋白混合物进行电泳分离，是一种多通道分离技术。通常情况下，Cy3和Cy5分别标记两组蛋白；Cy2标记所有组别蛋白的混合物，作为内参使用。电泳分离后，在激光扫描仪中分别用相应波长的激光进行扫描，这样在同一张凝胶中便可得到三组蛋白的图谱。凝胶扫描后，用专用软件进行分析对比，运用特殊算法，给出准确可靠的定量信息。DIGE在实验中引入内参，有效地改善了实验的重复性，大大提高了定量的准确性。

二、与传统双向电泳（银染或考染胶)相比，DIGE技术具有以下优势：

 1、灵敏度高，最低可检测到125pg的蛋白质；
 2、高效性，同一块凝胶上可以电泳两个样品，减轻了工作量；      
 3、线性范围更广,动态范围高达10-5；      
 4、定量精确, 采用内标消除了凝胶与凝胶之间的实验误差，显著提高了实验的精确度和可重复性。
 5、统计学分析，ImageMaster7.0（DIGE）软件自动分析，得到统计结果，降低了操作者之间的偏差。

三、DIGE技术服务流程

 图1：DIGE技术服务流程图. 1、样品准备：提取对照组和不同实验组的蛋白质,定量,Cy3和Cy5标记蛋白，同时将所有实验组与对照组的样品等量混合后Cy2标记，作为内标。2、蛋白质分离：等量混合三种荧光素标记后的蛋白质，2D-PAGE电泳分离，荧光扫描。3、蛋白质定量分析：ImageMaster 7.0（DIGE)分析同一蛋白质不同处理后的表达量变化。

四、DIGE技术服务内容
  1、样本制备与定量；
  2、荧光标记；
  3、双向电泳和图片分析；
   4、DIGE实验报告提交。

五、样本准备：
   原始样本或者提取好的蛋白皆可
 注：样本应避免各类污染和反复冻融。

六、实验报告内容
  1、DIGE荧光电子图片；       
  2、蛋白质点定量分析结果，包括差异点号码、差异倍数、pI和MW等；       
  3、完整实验报告，包括实验步骤、使用试剂、仪器、软件检索参数等。

七、DIGE实验服务案例

图2：DIGE定量分析结果。蛋白质样品经过荧光染料标记后双向电泳，ImageMaster7.0 (DIGE)分析差异点结果。

八、实验周期：1-1.5个月

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