【原创】脂性培养基制备方法步骤（棕榈酸、油酸）

不经常上论坛，偶尔上发现有多人PM我问脂性培养基制备方法，特在此列出，仅供参考，谢谢！
油酸存储液：10mM OA+10% BSA 溶液6ml（20% BSA溶液 3ml，20mM OA溶液3ml 1:1混合）
工作浓度：100-200uMOA（50X使用）

准备：20% 无脂肪酸-BSA溶液 3ml：质量体积比。0.6g d-BSA/3ml=20%。BSA相对分子质量约68000。
准备：20mM OA溶液3ml：相对分子量282.46，25℃时密度0.89g/ml。0.02mol/L*0.003L=0.00006mol，*282.46=0.016947g，0.016947g/0.89g/ml=0.01904ml=19.04ul（25℃用移液器量取）。
准备：0.1mol/L NaOH溶液10ml：0.1mol/L*0.01L=0.001mol/L，*40=0.04g。
准备：PBS溶液
1、 配制20% d-BSA溶液：PBS溶液预热至55度，量取0.6gd-BSA，置于50ml离心管，加入3ml PBS溶液，不要震荡或者混匀，直接放于高速离心机8K转离心20min，即可完全溶解（摇晃或者震荡会导致BSA结成块状结晶不溶解）。得到3ml 20% d-BSA溶液，外观呈棕黄色澄清样。（最后体积肯定会大于3ml。如果要精确定容，加入2.5ml PBS溶液离心溶解，之后再进行定容至3ml）。
2、 配制20mM OA溶液：取0.04gNaOH，溶解于10ml 去离子水，配成0.1mol/L NaOH溶液10ml，取3ml。
取19.04ul OA 加入3ml NaOH溶液中，置于75度水浴进行充分皂化约30min，最终至无色透明澄清。得到20mM 油酸钠皂化液。保持温度继续进行下一步操作。（如果冷却，则得到白色凝胶状固体，可再次于75度加热至澄清）。
3、 将保温的OA溶液迅速地加入BSA溶液，得到6ml 20mMPA+20% BSA 溶液。适当摇匀，置于一定温度（55度以下）助溶30 min（实际操作也可不助溶）。室温冷却后观察性状，为棕黄色澄清样，与原BSA溶液性状无差异，无任何固体或者絮状杂质，性状稳定。
4、 将存储液于超净台用细菌滤器过滤，即可于4度冰箱长期存储（有效期不能确定，1月？）。工作浓度可用含0.5% FBS的低糖DEME（待考虑？）培养基，以50X比例稀释，得到200uM PA+ 0.4% BSA + 0.5%FBS的低糖DEME培养基。具体视实验目的而定。


棕榈酸存储液：20mM PA+20% BSA 溶液6ml（40% BSA溶液 3ml，40mM PA溶液3ml 1:1混合）
工作浓度：100-400uMPA

40% 无脂肪酸-BSA溶液 3ml：质量体积比。1.2gd-BSA/3ml=40%。BSA相对分子质量约68000。
40mM PA溶液3ml：相对分子量256.42。0.04mol/L*0.003L=0.00012mol，*256=0.03072g。
0.1mol/L NaOH溶液10ml ：0.1mol/L*0.01L=0.001mol/L，*40=0.04g。
PBS溶液
5、 配制40% d-BSA溶液：PBS溶液预热至55度，量取1.2gd-BSA，置于50ml离心管，加入3ml PBS溶液，不要震荡或者混匀，直接放于高速离心机8K转离心20min，即可完全溶解（摇晃或者震荡会导致BSA结成块状结晶不溶解）。得到3ml40% d-BSA溶液，外观呈棕黄色澄清样。（体积会大于3ml。如果要精确定容，加入2.5ml PBS溶液离心溶解，之后再进行定容至3ml）
6、 配制40mM PA溶液：取0.04gNaOH，溶解于10ml 去离子水，配成0.1mol/L NaOH溶液10ml，取3ml。
取0.0307g PA 加入3ml NaOH溶液中，置于75度水浴进行充分皂化约30min，最终至无色透明澄清。得到40mM 棕榈酸钠皂化液。保持温度继续进行下一步操作。（如果冷却，则得到白色凝胶状固体，可再次于75度加热至澄清）
7、 将保温的PA溶液迅速地加入BSA溶液，得到6ml 20mMPA+20% BSA 溶液。适当摇匀，置于一定温度（55度以下）助溶30 min（实际操作也可不助溶）。室温冷却后观察性状，为棕黄色澄清样，与原BSA溶液性状无差异，无任何固体或者絮状杂质，性状稳定。
8、 将存储液于超净台用细菌滤器过滤，即可于4度冰箱长期存储。工作浓度可用含10% FBS的低糖DEME培养基，以200X比例稀释，得到100uM PA + 0.1% BSA + 10%FBS的低糖DEME培养基。具体视实验目的而定。
9、 50uM 40ml培养基 100ul存储液
100uM 40ml培养基 200ul存储液
200uM 40ml培养基 400ul存储液
300uM 40ml培养基 600ul存储液
400uM 40ml培养基 800ul 存储液
根据配置好的培养基的颜色，判断PH值的变化是否很大。
据计算以上配置比例，BSA：FFA为1:6，不能再减少BSA的比例，否则棕榈酸会析出。

20%d-BSA存储液3ml：质量体积比。0.6g d-BSA/3ml=20%，用于对照组。
10% d-BSA与NaOH混合存储液6ml 标准排查对照组
PBS溶液预热至55度，量取0.6g d-BSA，置于50ml离心管，加入3ml PBS溶液，不要震荡或者混匀，直接放于高速离心机8K转离心20min，即可完全溶解。得到20% d-BSA存储液3ml。
将20% d-BSA存储液3ml与0.1mol/L的NaOH溶液 3ml混合，形成10% d-BSA与NaOH混合存储液6ml，用来排查BSA、PH值、溶液中的其他毒性物质对细胞的影响。
工作浓度：0.2%-BSA。100X比例稀释，20ml培养基加入400ul存储液。