【求助】小鼠棕色脂肪前体细胞原代培养，怎样分离前体细胞呢？
这个帖子发布于 13 年零 163 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近在做小鼠棕色脂肪前体细胞原代培养，看了些相关文献，但是在分离细胞的时候，总是看不到细胞。
我的操作步骤如下：
1. 将两只小鼠拉颈处死，浸入酒精消毒10分钟，取出小鼠皮下脊柱旁棕色脂肪组织，放入盛有PBS的小烧杯中，带入细胞房。
2.将组织剪成1mm3小块，转移至15ml离心管，加入2-3ml消化液（含20g/L牛血清白蛋白，0.2%胶原酶Ⅰ），37℃消化1小时左右，每5分钟震荡一次。
3.用300目筛网过滤到小烧杯中，然后转移到15ml离心管中，离心1000r/min，10min，去除上清，在培养基中重悬，离心1000r/min，10min。
4.0.5ml培养基重悬，接种于培养皿中。37℃,5%CO2条件下培养。
每次只能看到培养皿里有些小点点，可能是脂滴什么的，养了一周左右，也不见有什么变化，也没有污染，不知道问题出在哪里。
希望有做过类似实验的老师指教一下。多谢！！
我的操作步骤如下：
1. 将两只小鼠拉颈处死，浸入酒精消毒10分钟，取出小鼠皮下脊柱旁棕色脂肪组织，放入盛有PBS的小烧杯中，带入细胞房。
2.将组织剪成1mm3小块，转移至15ml离心管，加入2-3ml消化液（含20g/L牛血清白蛋白，0.2%胶原酶Ⅰ），37℃消化1小时左右，每5分钟震荡一次。
3.用300目筛网过滤到小烧杯中，然后转移到15ml离心管中，离心1000r/min，10min，去除上清，在培养基中重悬，离心1000r/min，10min。
4.0.5ml培养基重悬，接种于培养皿中。37℃,5%CO2条件下培养。
每次只能看到培养皿里有些小点点，可能是脂滴什么的，养了一周左右，也不见有什么变化，也没有污染，不知道问题出在哪里。
希望有做过类似实验的老师指教一下。多谢！！
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