【求助】蛋白在beads上洗脱不下来

用anti-HA的aogarose beads结合蛋白，大概17KD，洗脱了之后发现什么都没有，拿beads去煮之后检测发现蛋白在beads上，现在想知道怎么才能洗脱下来蛋白？说明书里要求使用的洗脱液是0.1M的glycine HCL,PH 3.5。 我使用该洗脱液在常温下洗脱beads两次，每次3分钟，但是仍然无法洗脱下来。