【求助】血浆总RNA提取问题

最近在做血浆RNA提取的实验，发现了几个问题，求小伙伴们帮忙指导一下：
1、当天早上从临床采集的全血血样（EDTA抗凝），一般会在常温放几个小时，有时候放在4度冰箱，然后中午再开始做RNA提取，血样这样放置会有影响吗？
2、全血用4°C，3000rpm，离心10min，取上层血浆。取到上层血浆之后，需要到12000rpm离心之后再取一定量来做实验吗？
3、提取方法是Trizol法，加Trizol、氯仿、异丙醇和75%乙醇这些常规步骤之后，晾干20min，加入25ul无核酶水，然后有必要在56°C孵育吗？
4、每次提取的血浆总RNA，OD都是1.1-1.5，浓度值都在10 ng/ul左右，甚至更低（丧心病狂T_T），是RNA降解了吗？
怎样操作会比较好？
提取的RNA是用来做逆转录和RT-PCR的，检测miRNA的表达。之前做的PCR结果都还可以，但是OD和Con.太低了，有影响吗？
谢谢各位！