【求助】免疫共沉淀问题

大家好，最近在做免疫共沉淀，为了确保能出结果，我把一抗和珠子均孵育过夜了，结果我的目的蛋白IB是一条带，而IP的在目的条带下方有2-3条，是不是非特异的呢，我做WB的抗体是鼠的单克隆抗体，应该不会有杂带的啊，谢谢大家！
p.s.解释一下图片：1,2,3,是三个不同处理组，左边是用裂解后的蛋白跑的WB，右面是做的IP然后跑的WB。大家认为是右边的哪个条带啊，我的实验条件还需要优化吗，谢谢！
实验步骤如下：
1. 用预冷的PBS洗涤细胞两次，最后一次吸净PBS；
2. 加入预冷的IP buffer (500 μl/10 cm培养皿)；
3. 用预冷的细胞刮子将细胞从培养皿上刮下，把细胞悬液转到1.5 ml EP管中，4℃，缓慢晃动30min（EP管插冰上，置水平摇床上）；
4. 4℃，14000g离心15min，立即将上清转移到一个新的离心管中；
5.取一抗加入到总蛋白中，4℃缓慢摇动抗原抗体混合物过夜；
6. 取20 μl Protein A/G agarose，用200 μlIP buffer洗两遍珠子，注意减掉*尖部分，避免在涉及琼脂糖珠的操作中破坏琼脂糖珠；
12. 加入20 μl Protein A/G 琼脂糖珠来捕捉抗原抗体复合物，4℃缓慢摇动抗原抗体混合物过夜；
13. 2500rpm，离心5min，收集琼脂糖珠-抗原抗体复合物，去上清，用预冷的IP buffer洗3遍，500 μl/遍，2500rpm，离心5min；
14. 用60 μl 5×上样缓冲液将琼脂糖珠-抗原抗体复合物悬起，轻轻混匀；
15. 将上样样品煮5min，电泳。