蛋白纯化高手请指点(his)
PQE30表达载体,利用大肠杆菌M15表达,his tag 加在N端,15KD蛋白,SDS-PAGE电泳显示表达量很高。但Ni-NTA柱纯化不出来(尿素ph5.9和ph4.5的elution buffer,0.5ml各洗4次,按说明书操作),有时是结合量很低,有时是洗脱不下来,总之,elution buffer电泳后见不到特异条带,请高手指点一二,不胜感谢!!!
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 1871
PQE30表达载体,利用大肠杆菌M15表达,his tag 加在N端,15KD蛋白,SDS-PAGE电泳显示表达量很高。但Ni-NTA柱纯化不出来(尿素ph5.9和ph4.5的elution buffer,0.5ml各洗4次,按说明书操作),有时是结合量很低,有时是洗脱不下来,总之,elution buffer电泳后见不到特异条带,请高手指点一二,不胜感谢!!!
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