【求助】小鼠原代肝细胞培养过程中的困惑

小鼠原代肝细胞提取时，0.04%的胶原酶门静脉灌注30ml，摘除肝脏划破包膜，将肝组织悬液放入胶原酶中37度水浴消化10min，加入10%血清的培养基，200目过滤两次，50g离心3min，3次取沉淀，镜下观察；
存在的问题：
1、没有细胞存在，大量的絮状的物质漂浮在液体表面，接种后1天，包被后的培养皿底部大量的杂质贴壁，几乎没有细胞，整个培养瓶底黑黑的一层；
2、0.04%四型胶原酶体内消化30ml后，摘除肝脏直接放于10%血清的培养基中终止消化，冰上划破包膜，培养基变浑浊，离心后有大量的沉淀，接种后仍然没有细胞，只有大量的絮状的杂质和细胞碎片；
3、是消化过度还是消化不足？消化不足的话划破肝包膜后为什么培养基立即变浑浊，酶的浓度不高，消化的时间小于20min，消化过度的可能性也不是很大，为什么细胞都能为碎片了呢？游离肝细胞时用镊子划破包膜，不是直接剪碎，机械损伤也不是很大，细胞接种的时间小于2h。
希望前辈能给予一点指示。谢谢。