dxy logo
首页丁香园病例库全部版块
搜索
登录

【求助】P糖蛋白的目的条带区域一片黑(western blot)

发布于 2013-09-14 · 浏览 9952 · IP 四川四川
这个帖子发布于 11 年零 239 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
因毕业在即,所以正抓紧时间完成毕业课题。其中需要用western blot分析对阿霉素耐药的MCF-7/ADR的P糖蛋白含量。采用碧云天的膜蛋白提取试剂盒对细胞提取膜蛋白,然后用5Xloading buffer对蛋白进行处理,按照公司提供的条件,70度水浴加热10min,上样量20微克,140V电泳,转膜液加了10%的甲醇,转膜条件是100V,90min,5%加了TBST脱脂牛奶封闭2h,一抗用的ABcam的ab80594,4度过夜,TBST清洗6次,每次5min,二抗室温孵育1h,TBST清洗6次,每次5min,显色,没有明显的条带,只是目的条带区域是一片黑色的(见下图1)。这个条件是公司推荐的条件,当然自己之前也试过很多条件,耗时4个月,沸水煮10min,上样量20微克,80V电泳,转膜条件用过很多,260mA 60或120min,100V 60,120或240min,300mA 60(下图2),90或120min等,结果都是如此。
请问各位大神,这是一抗的问题吗?
现在考虑换抗体,abcam有两个抗体ab170903和ab170904都感觉可以,官网的说明上条带很明显,但是奇怪的是P糖蛋白的分子量是170 kda,但是abcam的抗体说明书上写的都是141kda,而官网上ab170903的条带出在250的位置上,ab170904的条带出在170的位置上,这个合理吗?ab170903能做流式,免疫组化和WB,ab170904只能做免疫组化和WB,但是ab170903只能识别人缘性的样品如细胞,但是ab170904除了适用于人缘性的样品外,还能适用于大鼠和小鼠来源的样品。二者链接分别如下:
http://www.abcam.cn/p-glycoprotein-epr10363-antibody-ab170903.html
http://www.abcam.cn/mdr1-epr10364-antibody-ab170904.html
麻烦大家帮我分析下问题,并且提下建议,该选择哪个抗体好点,在下已被折磨很久了,只求尽快解决问题!
img

img








最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 9952

25 23 2

全部讨论0

默认最新
avatar
25
分享帖子
share-weibo分享到微博
share-weibo分享到微信
认证
返回顶部