【求助】细胞爬片做免疫组化出现的怪问题

我用成骨细胞爬片做免疫组化时出现怪问题：老是只在片的四周才出现散在的阳性结果，而片子的中央基本没有着色，开始以为爬片没有做好，中间没有细胞，但苏木素复染发现细胞很均匀，整张片都有分布。多方求教不得其解，请高手指教。
一抗是Bcl-2(兔,Santa Cruz)，SABC法，片用18*18盖玻片栽成四片，泡酸、高压、明胶包被。
爬片用4%多聚甲醛固定20分钟，－20度备用。
染片步骤
1.  0.5%Triton X-100 孵育 20 分钟；
2.  PBS清洗标本 3次 各 2 分钟；
3.  3%H2O2孵育 15 分钟；（略过此步结果无变化）
4.  PBS清洗标本 3次 各 2 分钟；
5.  封闭血清孵育（5%正常二抗血清PBS液） 20分钟；
6.  一抗孵育（PBS配，滴度1：50－200，湿盒）4℃过夜或37℃ 60分钟（曾延长至室温过夜，冬天，南方，10度上下或37度2－3小时，结果依旧）
7.  PBS清洗标本 3次 各 5 分钟；
8.  二抗工作液湿盒中37℃孵育30 分钟；
9.  PBS清洗标本 3次 各 5 分钟；
10.  三抗湿盒中37℃孵育30 分钟；
11.  PBS清洗标本 3次 各 5 分钟；
12.  DAB显色约3~10分钟；