【经验】小鼠眼球取血

今天是五月一号，四月二十二日开始将孕鼠从实验动物中心SPF房间取回收取材料，到目前为止总算是可以非常顺利地采集满意的血液标本了，现将经验分享如下，也热烈欢迎在这方面有想法的人参与讨论，大家共同进步吧！
收取其他组织没有什么难度，我们采血所用的方法是摘取小鼠眼球取血，然后静置凝固后取上清，-80℃冻存备用。最开始采血遇到的难题主要有两个：1、标本量不够，静置后取的上清液不足以上机检测所需指标浓度。2、易发生溶血，影响指标的检测。到目前为止我也不知道溶血是怎么发生的，推测可能是因为采血时发现血液量不够用EP管刮了一下从眼球流出来的血液或者由于抓取不当小鼠动的太厉害？恳请指教。经过多次摸索--失败--总结后，获取比较满意的血液标本过程大概如下：
1、麻醉。我们采用的是乙醚吸入麻醉的方法，轻轻抓取小鼠背部皮肤组织，这个时候对手法要求不是很严格，只要能够让小鼠头部伸进装有用乙醚润湿的棉球的圆筒里即可。这时小鼠可能会反抗比较强烈，但一定要保证头部保持在圆筒里吸入乙醚，1-2分钟之后，（时间可以灵活掌握，如果乙醚量多，浓度高，麻醉效果会快一些；反之亦然。）小鼠抵抗性减弱，表现为四肢及尾部自然下垂，但是呼吸运动仍然很明显，可以看到腹部随呼吸起伏。这时将小鼠放于实验台上，可见其能保持趴着状态，但四肢不能运动，即小鼠不能向前爬行，眼睛自然睁开，呼吸运动明显。我没有试过将小鼠过度麻醉之后会是怎样的情况，但是如果麻醉程度不足的话，抓取小鼠时非常不顺利，因为它会扭头试图咬人或者使劲向后缩不让你抓取头颈部皮肤组织（小家伙聪明着呢）。
2、抓取小鼠。适当的抓取方法是成功取血过程中非常重要的一部，如果不讲究技巧胡乱逮住耗子就开始动手的话会造成本文开始提出的两种后果，所以，别以为逮耗子的技巧只有猫才会研究，我们也需要，哈哈哈哈哈。。。。。。老鼠颈部皮肤移动度大，抓取该部分组织不利于固定小鼠头部。恰当的方法是用左手拇指和食指靠近小鼠左右耳后，适当麻醉的状态下小鼠头部不能动，所以一定要趁这个机会找到合适的位置，两指一起向头后移动直至夹取后脑勺部分皮肤组织，这时你能感觉到整个小鼠头部比较固定，这样可以避免小鼠苏醒后头部乱动影响取血（乙醚麻醉后苏醒过来的时间比较短，所以抓取和摘眼球的动作都要尽可能地迅速），同时可以看到小鼠前爪向外伸开，即使苏醒过来也不能抓到眼部，第三点好处是，这样抓取后小鼠眼球突出，方便夹取。为充分固定小鼠，还需要将小鼠尾巴夹于无名指和小指的指缝间，中指和无名指自然弯曲成握拳状扶住腹部。这样的抓取就算比较完美的了，到这一步之后，离成功就不远了。
3、摘取眼球。最开始我采用的方法是先将EP管打开备于试验台上，右手持弯镊夹取眼球后迅速放下弯镊拿起EP管接住流出的血滴，这是一种不太保险的方法，稍微出点差错就可能错失一大滴血，宝贵的标本啊！后来先将EP管打开放于EP管架上，小鼠头部欲摘取的眼球靠近EP管口，摘取眼球后血液自然滴入管中，这样就方便多了。在血液滴入的过程中小鼠很可能已经苏醒过来，有反抗动作，如果采用上述的抓取方法，只需轻轻用力就可以控制住小鼠的运动，对采血没有影响，OK，大功告成。
希望各位战友能分享自己宝贵的经验，大家一起交流，也祝大家实验顺利！
虽然每次处理老鼠的时候比较快准狠，我还是敬仰每一个存在的生命，真诚地感谢为了科学而牺牲的老鼠们！