【方法经验】PC12细胞培养、总结

结合ATCC上的培养指南和自己养PC12细胞经验，写个总结的方法与大家一起讨论：
PC12有2种状态：未分化与分化（NGF刺激后），至于低分化、高分化在文献中未见过
1.未分化状态培养（未分化的PC12细胞为悬浮细胞，如只是需要扩增细胞及维持未分化状态，不需要多聚赖氨酸包被）
a. 培养基：1640+10%马血清（56℃30min灭活）+5%胎牛血清+青链霉素
b. 在T25或T75培养瓶中培养
c. 传代后（传代不需要胰酶消化，细胞呈抱团悬浮生长），接种细胞密度为5X105/ml，每2-3d换液，6-7d细胞密度至2-4X106/ml时可传代
d.因为是悬浮细胞，所以换液时需离心重新加入培养基（也有说法是将含细胞的原有培养液1瓶分至2瓶，再加入新鲜培养基至所需要的培养液量，个人用离心法，后者的话觉得相当于传代了）
不用多聚赖氨酸或其他胶原包被（贴壁会细胞分化：长出突起），在转染或分化时需包被
未分化的图等几天拍了再上传

2.分化状态培养
a. 培养基：DMEM-F12+10%胎牛血清+青链霉素
b. 包被：种板前一天可用30-50ug/ml多聚赖氨酸包被培养板
c. 接种密度：1X104/cm2，一般6孔板为9.6cm2，即接种1X105/孔
d. 接种后培养15-18h，之后加入100ng/ml的NGF诱导神经分化，48h（NGF用北大之路的注射用鼠源性神经营养因子也可，本人就用的）
e. 转染或加药处理可根据实验设计，在NGF诱导后或诱导前加入

未分化图片
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分化后的图
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