【求助】质粒缺失突变-6.8kb(缺失53bp)实验设计问题
这个帖子发布于 12 年零 226 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
各位大虾
最近我正在做一个质粒缺失突变的实验，但是总是不成功，我的质粒大小是6.8kb, 需要缺失53个bp的片段长度，我已经做了估计不下50次了，都没有成功，我的实验设计是先设计引物，包含需要切除片段的上游16-18bp和下游16-18bp,引物总长度32bp，然后进行PCR，用的是pfu酶，设计的程序是94-3min，94-30s,( 43-55)1min,68-15min,4℃ ∞
然后用DpnI酶切2h, 然后转化，但是测序结果总是不成功，求大虾帮忙，各位前辈，谢谢！！！！！
最近我正在做一个质粒缺失突变的实验，但是总是不成功，我的质粒大小是6.8kb, 需要缺失53个bp的片段长度，我已经做了估计不下50次了，都没有成功，我的实验设计是先设计引物，包含需要切除片段的上游16-18bp和下游16-18bp,引物总长度32bp，然后进行PCR，用的是pfu酶，设计的程序是94-3min，94-30s,( 43-55)1min,68-15min,4℃ ∞
然后用DpnI酶切2h, 然后转化，但是测序结果总是不成功，求大虾帮忙，各位前辈，谢谢！！！！！
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