【求助】Western blot内参actin结果重复不出来
发布于 2012-09-12 · 浏览 5208 · IP 江苏江苏
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我前阶段做western内参actin结果好的，条带也清晰，但最近我用相同的条件再做就显不出条带，或是背景很深，不知道原因处在哪。
我是电泳60v/80v,转膜300ma/1.5h,pvdf膜，PBST漂洗一分钟后5%脱脂奶粉封闭2h，pbstx洗膜5min,孵一抗1：3000，室温摇床上一小时后，4度过夜
PBST洗5min4次，孵二抗1：2000，室温摇床上一小时，洗膜5min4次，ECL显影，直接用成像仪显示
以前是曝光1分钟就可见清晰条带，并且预览的时候也可以看见条带
最近几次曝光超过15min，预览也看不到条带，拍出来后整张膜都是亮得
曝光时间是仪器自动设定的，
我考虑的原因可能有封闭液脱脂奶粉浓度低封闭不全，抗体会不会失效，转膜过程中膜干掉会不会有影响
还有什么原因呀，请各位高手指教，谢谢
我是电泳60v/80v,转膜300ma/1.5h,pvdf膜，PBST漂洗一分钟后5%脱脂奶粉封闭2h，pbstx洗膜5min,孵一抗1：3000，室温摇床上一小时后，4度过夜
PBST洗5min4次，孵二抗1：2000，室温摇床上一小时，洗膜5min4次，ECL显影，直接用成像仪显示
以前是曝光1分钟就可见清晰条带，并且预览的时候也可以看见条带
最近几次曝光超过15min，预览也看不到条带，拍出来后整张膜都是亮得
曝光时间是仪器自动设定的，
我考虑的原因可能有封闭液脱脂奶粉浓度低封闭不全，抗体会不会失效，转膜过程中膜干掉会不会有影响
还有什么原因呀，请各位高手指教，谢谢
最后编辑于 2012-09-13 · 浏览 5208
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