【求助】泳道背景深，但目的不明显很细并且只有某个泳道有目的。这样的结果该怎样调整浓度？

我190kd蛋白 转膜100v 3h
一抗 santa 1:200
二抗 中杉 1:1000
洗膜都是 10min ×3次
结果总是泳道背景深 泳道之间无背景
目的条带 只有某个泳道有 并且在高背景泳道中 很不明显 且很细
二抗我准备稀释到1:2000，因为二抗已过保质期，一个多月之前做另一个目的蛋白时用的浓度是1:2000结果很好。
现在 我不知道该怎么做一些有效的改进，请大家给予意见。
谢谢，等扫描后尽快上图。