【求助】电泳条带如何判断RNA完整性的好坏?
纯度检查:OD260/280在1.7-1.8之间,OD260/230却很低,在0.7-1.1;
理论上OD260/280在1.8-2.0之间,说明无蛋白质污染和抽提液成分残留,OD260/230>2,说明无小分子或盐等干扰杂质存在。
电泳图:
最上面是加样孔,从这张图来看,我的杂带这么多,请问这是和操作不当的哪些有关,用的是全式金Transzol提的,按照说明书的提取步骤来的,所使用的TIP头和EP管都是用DEPC水处理过的,提取步骤如下:
(1)吸去细胞培养液,1*PBS清洗一次
(2)每 10cm2加入 1mlTranszol,移液器吹打细胞使其脱落
(3)将内含细胞的裂解液转移至离心管中,用移液器反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀
(4)室温静置5min
(5)每使用 1mlTranszol加0.2ml氯仿,剧烈震荡15秒,室温孵育3min
(6)1,0000g 4℃离心 15min
(7)取上层水相,加入0.5ml异丙醇(每使用 1mlTranszol取 400μl 水相),混匀,在 15-30℃条件下静止 10min。
(8)10,000g 4℃ 10min,去上清。
(9)加75%乙醇(处理过的DEPC水配置)洗涤沉淀,每使用 1mlTranszol加入 1ml75%乙醇。
(10)室温晾干沉淀约5-10min,加入50ul溶解液
(11)55-65度孵育10分钟,样品于-80℃保存。
