【求助】caspase-3裂解带跑不出来
发布于 2011-08-01 · 浏览 7621 · IP 广东广东
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最近在做细胞凋亡相关实验，对caspase-3跑western的时候，32KD条带出来了，但cleaved条带总是没出来（注：PARP和caspase-9的裂解带都跑出来了），不知道问题出在哪里，现在天天挨老板骂，***各位大侠帮忙，急急急急！！！！！！
补充：1、block是用5%牛奶封闭的，一抗二抗也是用5%牛奶稀释的
2、提蛋白的时候没加PMSF，蛋白提完后放-80冰箱两天后跑western
3、镜下观察有明显的浓度梯度，而且PARP和caspase-9的裂解带都跑出来了
4、一抗用过cell signaling和santa的，结果基本都一样，只出现32KD，没出现cleaved带
补充：1、block是用5%牛奶封闭的，一抗二抗也是用5%牛奶稀释的
2、提蛋白的时候没加PMSF，蛋白提完后放-80冰箱两天后跑western
3、镜下观察有明显的浓度梯度，而且PARP和caspase-9的裂解带都跑出来了
4、一抗用过cell signaling和santa的，结果基本都一样，只出现32KD，没出现cleaved带
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 7621
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