【讨论】诡异的血，提不出PBMC

今天提PBMC，折腾俩小时没提出来，把过程写出来大家看看，究竟是怎么回事。

首先说明一点，提取PBMC我做了90多次了，操作没有什么问题，最近提取条件也很稳定。

今天同时收到三个病人的血标本。同时开始操作，同时离心，基本能保证所有条件都一样。但离心完毕，发现有两个病人的血标本离心都很好，与平时所做的一样，但是第三个病人的血就很差劲：底部是红细胞，最上层是清亮血浆，淋巴细胞分离液层是大量的悬浮散在红细胞（未凝集），其上是与之连续的大量红细胞，红细胞密度更集中，而PBMC层可见一层白细胞，但与红细胞连续，无分界。

我认为可能这病人血特殊，需要离心时间长，于是继续离心10分钟，离心力不变。离心完毕仍未见改善。但仍我相信这个是可以提取出PBMC的，因为白细胞层是能看到的。我用新离心管加4ml淋巴细胞分离液，把含有白细胞那一层的细胞吸出来（仍含有较多量红细胞），加在这一支新的离心管中，先离心15分钟，转速与之前相同，1600rpm。

离心完毕，观察离心管，可见底部只有少量红细胞，分离液层清晰，其上是大量散在红细胞，再上是黄色浑浊区域，最上是薄层血浆层。有可能离心时间不够，同样条件再次离心15分钟。

离心后可见底部红细胞量增加，但增加量有限，分离液层依然清晰，其上仍含有大量红细胞，再上层黄色浑浊区域增厚，血浆层增厚。未见PBMC层。

至此血标本已折腾了2个多小时了，总离心时间达70分钟，我认为这是不可能再提出来PBMC了，于是没有再进行提取操作，但仍把黄色混浊区吸出洗涤了两遍，因为含有红细胞较多，而且不想再裂红折腾细胞了，于是停手。

我最初认为反复离心不下的红细胞是不是碎片。但我想到我之前采集血浆时，离心后的血浆完全是正常的黄色，如果是溶血的话血浆不会是黄色的，而是红色的，而且溶血的标本提取PBMC时分离液层不可能是透明的，因而基本可以排除这一条。其他的原因没有想到，不知道各位按经验来看这究竟是怎么回事？

我知道有的人会说病人血的特异性造成的，我觉得这个解释无法说服我，我想多数事是可以解释的，请大家发表意见。