【文献讨论】中性粒细胞分离的四种方法（附文献原稿）

这是我最近看文献时看到的，拿出来与大家交流。
美国病理学杂志上有关中性粒细胞分离的四种方法：
1、 标准方法：Ficoll-泛影钠（Ficoll-Hypaque）密度梯度及红细胞裂解法
1）  取一50ml聚乙烯管，无菌采集人外周静脉血，加4.4ml3.8%或5%的柠檬酸盐液定容至40ml。上述全血300gX20min，离心，室温。
2）  吸出富含血小板的上清，2500gX15min，制备无血小板血浆（platelet-poor Plasma, PPP）。
3）  余下的沉降全血加入5ml　6%Dextran (分子量500,000，用无菌生理盐水配制)，并用生理盐水（0.9%）调节最终体积至50ml，轻轻、彻底混匀。室温沉降30min.
4）  吸出富含白细胞的上层液，275gX6min。
5）  沉淀的细胞用8mlPPP-生理盐水（1：4）重悬，并移到15ml离心管中。
6）  悬液细胞上面加入3mlFicoll-Hypaque（密度1.077），750gX5min，室温。
7）  吸取富含中性粒细胞和红细胞层，用0.155M　NH4Cl重悬细胞，使红细胞裂解，然后中性粒细胞用含0.25%BSA Hanks平衡液（HBSA，无钙）洗2次，最终用HBSA（含钙）重悬。
8）  用此法可得95%以上的中性粒细胞。