【我的综述】血小板活化因子及其拮抗剂的研究进展
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血小板活化因子及其拮抗剂的研究进展
摘 要：血小板活化因子 (Platelet activating factor， PAF) 是一种具有广泛生物活性的内源性磷脂类介质，可由肥大细胞、内皮细胞、巨噬细胞、多形核白细胞等细胞产生。另外，体内多种细胞（如内皮细胞、巨噬细胞）表面含有特异性的PAF受体，PAF与其受体结合从而产生一系列的受体后效应。生理状态下，体内PAF主要参与细胞内信息传递和调节，与生殖、胎儿发育、分娩和肾脏的作用联系紧密。在病理情况下，PAF可以促进血小板、中性粒细胞聚集，细胞脱颗粒、释放氧自由基（OFR）、肿瘤坏死因子 (TNF)、白介素 (ILs)、花生四烯酸及代谢产物，从而增加血管通透性，促进血栓形成，诱发平滑肌收缩，在炎症、哮喘、心脑血管微循环障碍、胃肠粘膜损害等一系列相关疾病的发生发展过程中发挥重要作用。近年对它的基础生物学方面的研究不断深化，它的受体信号转导机制逐步得到阐明，本文将对PAF的生物学活性、受体信号转导机制、及拮抗剂的开发应用等方面的研究概况作一综述。
关键词：血小板活化因子；PAF受体；信号转导；拮抗剂
一、PAF的构效关系
1、 PAF的结构
1972年，Benveniste等1发现嗜碱性粒细胞在被IgE攻击后能产生一种可使血小板活化、聚集、释放组胺和5-羟色胺的可溶性脂质，称之为血小板活化因子。其后虽然证明PAF的作用远不止活化血小板，但命名一直沿用至今。同期，Muirhead等2从大鼠肾髓质细胞中分离出一种类似于PAF的脂质，因该物质在肾动脉夹所致大鼠高血压模型中，具有降压作用，故称之为抗肾性高血压脂质。1979年证实2-4，这两种物质具有相同结构，即它们为同一物质。其化学名称为：1-醚基- 2- 乙酰基- Sn- 甘油－ 3- 磷酸胆碱 (Sn代表甘油骨架)，分子量为1100，因在甘油骨架1位和2位上分别有醚键和乙酰键，故又有PAF 酰醚之称。
2、 PAF的构效关系
在对PAF的配基进行了广泛研究之后，目前认为PAF主要存在下列构效关系5：(1)其Sn1位上的疏水基团对PAF活性的发挥具有重要作用，C16～C18链可有效的引起血小板活化，降低血压及血小板减少，而C14链可使支气管收缩；(2) Sn2位的乙酰基对PAF的生物学活性起决定作用，若PAF在PAF乙酰水解酶 (PAF AH) 的作用下，水解乙酰基为羟基，则PAF完全失活；(3)Sn3位上的磷酰胆碱基团对生物活性很重要，它的最佳长度是从氨基端开始烷基数ｎ=3；(4)甘油基的空间螺旋结构特性及长度至关重要，而与取代基的空间排列无关，PAF有左旋和右旋两种异构体，但只有天然形成的左旋异构体具有生物学活性6。另外，PAF的疏水部分与细胞膜表面结合，脂肪链插入膜内，从而导致膜流动性和膜活动性改变7,8。
3、 PAF的类似物
与PAF结构类似的某些物质，也具有与PAF相似的生物学活性：如抑制淋巴细胞的趋化、减轻炎症反应、降血压、促使血小板聚集等，但其活性远较PAF低，并易被PAF拮抗剂阻断。此类物质主要有：缩醛卵磷脂、缩醛脑磷脂、新生途径中的PAF前体(Lyso PAF)、PAF氧化样磷脂。值得注意的是， PAF氧化样磷脂是由自由基刺激产生的，不是通过酶促反应生成，其生物活性虽不如PAF强，但当氧自由基强烈攻击磷脂前体时，可大量产生，并同样能发挥较强的生物学活性作用，故在可产生氧自由基的炎性组织，缺血或再灌注损伤部位，它的作用仍不可忽视9,10。近年来发现，在引起动脉粥样硬化的形成中起着关键作用的氧化低密度脂蛋白中也含有类PAF的磷脂类物质，它能与多种细胞表面的PAF受体结合并产生相应的下游信号， 刺激巨噬细胞、单核细胞等的游走和释放炎性介质，导致血管壁泡沫细胞的形成，产生动脉粥样硬化的早期症状11。
二、PAF的生理、病理作用
2.1 PAF的生理作用
PAF是生理状态下一种极为重要的介质，和生殖、胎儿发育、分娩的作用联系紧密。猿猴在发情期其精子中PAF的含量较平时明显增高，人的精液中PAF含量高则受孕几率大。同时检测到人精液中还含有与PAF的灭活相关的Lyso-PAF乙酰基转移酶和PAF乙酰水解酶，在受孕时如果去除它们，则PAF的含量增加，精子的活动能力和受孕几率也都明显增加，PAF受体拮抗剂可以降低精子的活性，阻止顶体反应，抑制卵母细胞的受孕12。鼠的胚胎PAF的生成量与胚胎发育成熟的时间关系密切，正常情况下PAF随着胚胎的发育以恒定速率（约为1.4-1.9）生成，在八倍体期和桑椹胚期它的生成速率猛增至7；同时在双细胞期胚胎的PAF 受体的表达量最高，随后逐渐下降，直至桑椹胚胎期，表达量再度增高13。PAF在妊娠后阶段的重要性也得到证实，PAF可使基质金属蛋白酶1（matrix metalloproteinase-1，MMP-1）的表达增加，从而加速子宫颈的胶原溶解，促进分娩期子宫颈的快速成熟14。从分娩妇女的羊水中发现PAF，而非妊娠妇女中却没有发现。当PAF在胎儿肺与胎儿其他组织的合成增高时，母体血浆中的PAF乙酰水解酶迅速降低，这可解释分娩妇女羊水中PAF水平较高的原因15。
2.2 PAF的病理作用
PAF涉及许多疾病的病理机制，体内许多细胞如嗜酸、嗜碱、嗜中性粒细胞、单核和巨噬细胞、肥大细胞、血小板和内皮细胞等在一定条件刺激下均可产生PAF，促进血小板和中性粒细胞等的聚集，并促使这些细胞产生肿瘤坏死因子、白介素、超氧化物等，介导疾病的发生发展。近年来在对心脑血管、肺、胰腺、胃肠道等器官疾病的研究中，发现PAF发挥着重要作用。
2.2.1、 PAF在缺血性心血管疾病中的作用研究
心脏本身可以产生PAF，并可表达其受体,PAF作为细胞内和细胞间的沟通信使，可通过调节心肌收缩的节律性和影响冠状动脉收缩导致心肌缺血、心肌梗死和心性猝死16。PAF主要依赖以下机制介入心脏功能：①影响心肌细胞的膜电位。PAF可抑制Na+，K+-ATP酶的功能，通过抑制微弱内向整流K+通道（The Weakly Inward rectification K+ channels，TWIK）相关的酸敏感钾通道[TWIK-related acid-sensitive K(+) background channel (TASK-1)]引起心肌自律性异常、动作电位的平台期阻滞以及早后除极的延缓，从而导致室性心率失常，这一效应可被PAF受体拮抗剂BN50739和TASK-1抑制剂所阻滞17，18。②促进血小板的聚集和活化。临床观测到无ST增高的急性冠脉综合症的病人对PAF的刺激表现出强特异性和敏感性，其血浆中血小板的聚集速度和强度远远超过正常人19。而在病灶部位炎性细胞浸润后，PAF则可通过自分泌和旁分泌效应进一步破坏内皮细胞基底膜上的磷酸化蛋白多糖，使血小板粘附，形成血栓块，最终在该部位出现纤维蛋白沉积20。这对于血栓和动脉粥样硬化的形成起着重要的作用。③活化中性粒细胞。PAF对中性粒细胞具有趋化作用，促使它向心肌缺血及梗死区游走、聚集，释放溶体酶、AA、白三烯及氧自由基，造成“氧灌注无血流区”，加重心肌缺血及再灌注损伤。PAF与中性粒细胞表面相应的受体结合后，引起钙离子内流的增加，上调CD11/CD18整合素复合物含量，使中性粒细胞沿着血管壁滚动，并与表达免疫蛋白超家族粘附分子的内皮细胞表面强烈粘附，同时在趋化因子的作用下穿过细胞间隙，侵入病灶部位，加重局部炎症。实验证实以PAF受体拮抗剂TCV-309灌注心肌缺血动物，中性粒细胞浸润的现象能得到较好的控制，灌注组的体动脉血压和动物存活率明显高于造模组，心脏功能也可维持较长时间。因此认为PAF活化中性粒细胞在心肌缺血再灌注性损伤引起的心功能障碍中起到不容忽视的作用21。④调节内皮细胞功能。内皮细胞表面存在PAF受体结合位点，所以由内皮细胞或者其他炎性细胞释放的PAF参与调节内皮细胞的多种功能。PAF刺激人血管内皮细胞产生多种血管活性物质（如PGs、TXA2和纤维蛋白酶等）直接影响冠状微血管舒张功能22。同时PAF还能引起内皮细胞的细胞骨架的改变导致细胞孔隙的增大，如缺血心肌细胞培养上清能促进PMN穿透心肌内皮细胞，其原理在于它促进内皮细胞释放PAF和氧化性物质，从而改变细胞骨架，增大内皮细胞表面E选择素和细胞间粘附分子－1的表达23，这些变化利于PMN由滚动转为粘附状态，进而穿过内皮细胞，侵入病变组织。血管新生对于心肌梗死等疾病发生后的心脏修复有着重要意义， TNFa和血栓形成素等多肽介质所引起的血管生成依赖于内皮细胞PAF的释放，所以 PAF可能为这些多肽的第二介质。同时PAF的某些生物活性类似血管内皮细胞生长因子(VEGF)，可直接刺激内皮细胞发生迁移和释放NO，增加血管的通透性，促进新血管生成 24,25。
2.2.2、脑缺血病理过程中PAF对脑功能损害
当脑组织受到外部细胞因子和缺血、缺氧等刺激时，会导致ATP的消耗，进而可促进磷酸盐乙酰转移酶（AGP）、LysoPAF乙酰转移酶的活性，增加了脑中再生途径的PAF生成。而PAF作为炎性因子又可刺激脑内皮细胞的活化，引起胞内钙离子的增加，促进转磷酸胆碱酶（AAG）的活性，促进大脑内皮细胞以新生途径合成PAF， 所以在脑缺血病理状态下，PAF的生成是过度产生的26。PAF参与脑缺血病理过程各个环节，从血栓形成到缺血损害，PAF均起重要作用。首先，PAF可通过促进血栓形成，降低脑血流量，增加脑耗氧量，加重脑水肿，改变血脑屏障的功能。它可增加脑血管内皮细胞的通透性，改变局部脑血流量；刺激内皮细胞中与粘附相关的P选择素、E选择素和粘附分子－1等表达，引起血小板、中性粒细胞活化和粘附27，促使其释放血管活性物质如组胺、血清素、血栓烷Ａ和白三烯等，引起血管栓塞或血管通透性增加，加重脑水肿；促进花生四烯酸类物质的释放和氧活性物质的产生，增加血脑屏障的通透性，加重炎症反应28 29。实验中可见静脉灌注PAF可引起大脑皮质区血管淋巴细胞的粘附及通透性的增加，并呈剂量依赖效应，1uMPAF所产生的血脑屏障的损害程度与脑缺血缺氧后再灌注的结果相似，而这种效应可以通过静脉注射PAF受体拮抗剂WEB2086来降低 30。其次，PAF可增加神经细胞内钙离子浓度,促进兴奋性神经递质和炎性介质的释放，扰乱细胞膜功能。脑缺血时PAF可通过与之特异受体相偶联的G蛋白结合，激活磷脂酶C(PLC)，从而促进磷脂肌醇代谢增强，使二酰基甘油(DG)及三磷酸肌醇(IP3)水平增高，最终引起神经细胞内Ca2+增加。钙内流动增加抑制转磷酸胆碱酶（AAG）的活性，并激活磷脂酶A2，使得脑缺血状态下PAF含量进一步增加；同时过量Ca2+可以促进兴奋性氨基酸（喹啉酸、门冬氨酸等）的释放，引起蛋白激酶C的活化，促使毒性自由基地生成；使线粒体氧化磷酸化脱偶联，发生功能障碍，抑制细胞呼吸，导致神经细胞膜结构改变，离子通道受损及跨膜信息传递紊乱，发生不可逆性损害31。
2.2.3、对中枢神经系统的影响
在中枢神经系统，PAF与花生四烯酸代谢密切相关，共同参与了神经细胞损伤与修复，突触再生与重塑及海马神经元长时程增强（LTP）。生理条件下，中枢神经系统PAF作为调质，主要通过突触前受体调节多种神经递质的释放，如抑制突触膜γ-氨基丁酸（GABA）受体通道开放。此外，其还参与了胎脑发育期神经细胞的增殖与分化32。病理状态下，PAF对中枢神经系统的损害机制是多方面的：①PAF在兴奋毒性氨基酸引起的细胞凋亡过程中是由膜磷脂前体细胞生成的33，它在脑中的含量增加会激活PI3K，加重神经元细胞的Ca2+超载，刺激线粒体渗透性转移和细胞色素C的生成，诱导环加氧酶 （COX2）的产生，参与癫痫发作过程中突触的重组。PAF同时还能调节神经元中谷氨酸盐受体和***A受体的功能，增加兴奋性氨基酸诱导细胞凋亡的毒性。最终导致线粒体功能缺失和神经细胞的不可逆性损伤。②花生四烯酸代谢及活化PI3K均伴随自由基的产生，可导致脂质过氧化级联反应、DNA多核苷主链断裂、蛋白质交联等34,35。③介入信号传导通路，促进即早基因的表达。在神经元中，PAF至少有三个结合位点：一个突触小体结合位点和两个微粒体结合位点。PAF与突触小体上的G蛋白偶联受体相结合会促进兴奋性谷氨酸盐的释放，抑制长时程增强(LTP)，致学习与记忆功能障碍，因此被认为是一个潜在的LTP逆行信使36；当它与微粒体上的受体结合时则可活化JNK、ERK和p38有丝分裂素活化蛋白激酶，促使即早基因的强表达。JNK和ERK又可以上调即早基因和COX2的表达。PAF受体拮抗剂BN50730可抑制培养的大鼠海马组织p38、JNK和ERK激酶的活化。脑内用BN50730预处理可以降低海马回电惊厥性休克所引起的Zif-268和C-fos基因表达，并能抑制COX2的表达，减轻神经细胞的变性、凋亡和坏死37。
2.2.4、PAF对胰腺功能的影响
急性胰腺炎的组织内PAF的含量明显增高，同时胰腺内皮细胞的PAF受体表达增加，PAF被认为是在胰腺炎病理过程中重要的炎性介质，它能够引起机体全身性效应，导致微循环障碍和多器官的衰竭。由蛙皮素诱导的急性胰腺炎模型中如果联用PAF作为刺激剂，可见胃十二指肠和肠系膜上动脉的血流量急速下降，血浆淀粉酶和脂肪酶水平也大大增高，组织学检测发现广泛而显著的弥散性出血和炎性细胞浸润38，说明PAF在急性胰腺炎中可进一步使器官发生循环障碍，最终导致多器官衰竭。虽然许多实验证实PAF参与急性胰腺炎的发病过程，但其确切的作用机制还不甚明确，可能有以下几个方面：①PAF使胰腺腺泡细胞内钙离子增加，从而刺激和活化胰酶，参与胰腺自身消化过程39；②PAF可上调内皮细胞粘附分子I(ICAM-I)及整合素β2的表达，增强中性粒细胞与内皮细胞的粘附作用，促进中性粒细胞聚集并大量释放其他炎性介质，增强炎性反应，导致胰腺内皮细胞损伤40,41； ③PAF可以增加肠上皮细胞的通透性，导致局部水肿的发生，促进中性粒细胞脱颗粒，释放炎症介质，破坏肠道屏障功能，肠道细菌通过肠系膜淋巴结转移到远处器官，造成多器官功能障碍42,43； ④PAF引起心输出量降低，血液粘滞性增加，毛细血管通透性增加，胰腺血流减少，导致胰腺组织的破坏44。许多正在进行开发研究的PAF受体拮抗剂对于胰腺炎的治疗作用也证明了PAF与胰腺炎发病有关。Lane等用特异性的PAF受体拮抗剂昔帕派（Lexipafant）对抗急性胰腺炎，结果发现它不仅可以减少急性胰腺炎的局部炎症反应，同时对急性胰腺炎导致的全身性病变也有抑制作用，它能够降低肺中的髓过氧化物酶和血清中细胞因子TNFa、IL1和淀粉酶等的活性，对胰腺炎的并发症有良好的抑制作用45，目前为止，在美国已经成功完成Lexipafant急性胰腺炎的三期临床工作。赵40等人在研究中证实PAF可通过中性粒细胞的聚集诱导粘附分子的表达，这些粘附分子在急性胰腺炎的并发症中发挥着不容忽视的作用，PAF受体拮抗剂不仅可降低粘附分子的表达量，而且还能抑制炎症反应的发生。
2.2.5、PAF在胃肠道炎症反应中的作用
PAF在胃肠道急性炎症的发病中的作用还不是非常明确，但是在慢性胃炎和幽门螺旋杆菌引起的胃肠道病变的活组织检查时都发现有PAF和它的前体物质，食管炎和糜烂性胃炎中PAF的生成也明显增高46 。PAF引起胃肠道疾病的主要机制在于：①PAF促进上皮细胞分泌粘附分子，诱发炎性细胞的浸润，增加血管通透性，促进水肿的发生，引起粘膜循环障碍47。 PAF可引起空肠、结肠、回肠和胃基底膜的收缩，同时增加十二指肠、空肠、回肠、结肠和肠系膜的血管通透性，引起肠黏膜微循环障碍，静脉瘀血，黏膜水肿，炎性细胞的浸润乃至发生黏膜的坏死、出血和溃疡的形成48。②PAF刺激胃壁细胞分泌胃酸，加重对胃粘膜的损害。Sobhani等人利用PAF受体拮抗剂可抑制PAF与胃壁细胞上特异性受体结合，减少胃酸的分泌，保护胃粘膜功能49。③PAF通过活化花生四烯酸类物质的代谢，促进氧自由基的产生。氧自由基可与胞膜上的酶和受体进行共价结合，或直接引起膜多聚未饱和脂肪酸（PUFA）的过氧化而影响膜结构，致使膜的孔隙扩大，通透性增加，毛细血管内皮细胞损伤，加重炎症反应，导致细胞广泛性损害和病变。有研究报道，应用PAF受体拮抗剂能明显改善内毒素休克所致的胃黏膜缺血，减轻出血性休克中氧自由基所引起的胃和十二指肠的形态学上的损伤50,51。
2.2.6、PAF在哮喘中的作用
临床研究证实哮喘患者血浆中PAF含量明显高于正常人，而且他们的痰液和支气管渗出液中都有高浓度的PAF，其肺部PAF受体的表达也大大增加，高表达的PAF受体能够增强乙酰甲胆碱诱导的气道高反应性作用的强度52。细胞培养研究发现支气管上皮细胞、肺泡巨噬细胞、肺血管内皮细胞和平滑肌细胞均可合成PAF。PAF能引起支气管收缩,支气管粘膜粘液分泌亢进,气道高反应性,血管壁通透性增加,肺水肿和肺动脉高压等病理生理改变。吸入PAF后可致肺部气体交换障碍，血管通透性增高，导致肺水肿的形成，呼吸系统抗性的增强和外周血中性粒细胞的增加53。嗜酸性粒细胞被认为是导致哮喘病气道病变最重要的效应细胞54。在急性肺炎中PAF能够快速引起嗜酸性粒细胞钙离子内流的增加，中性粒细胞的变形和趋化性的增强，诱导毛细血管内皮细胞表面粘附分子配体ICAM的表达增加，从而促使嗜酸性粒细胞和中性粒细胞在肺微血管发生快速聚集，与炎症部位毛细血管粘附增加55。活化的嗜酸性粒细胞会释放相应的炎性介质，包括高碱性细胞毒蛋白、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白等，这些蛋白对上皮细胞具有显著的细胞毒性，可能与上皮细胞脱落坏死有关。Federico等报道，PAF不仅可以通过募集肺部嗜酸性粒细胞，继发炎症反应，还可激活花生四烯酸的5-脂氧酶代谢途径，促使肺部产生TXA2和LTs，使呼吸道上皮细胞损伤，内皮细胞通透性增加，促进支气管收缩和肺水肿的形成，增加局部缺血的程度并使呼吸道气流产生严重障碍56。
三、PAF的代谢特征、受体信号转导机制
3.1 PAF的代谢特征
3.1.1 PAF的合成
人和哺乳动物的多种细胞均能产生PAF,如嗜酸性粒细胞(Eos)、嗜碱性粒细胞(Bas)、多形核白细胞(PMN)、单核－巨噬细胞(Mon M )、肥大细胞(Mac)、平滑肌细胞、血小板(PL)、内皮细胞(EC)、以及肾实质、髓质细胞等。静止细胞不合成PAF,只有在激动剂的刺激下才合成PAF,其激动剂主要有:白三烯(LTs)、TNF、白介素 (IL)、内毒素、三磷酸腺苷(ATP)、组胺、缓激肽、OFR、免疫球蛋白、补体片断及凝血酶、胶原等。
PAF在体内的合成途径主要有两条: 新生途径(De novo pathway) 和修饰途径(Remodeling pathway)。新生途径是生理条件下合成PAF的主要途径,它的合成前体底物为烷基甘油磷酯，合成部位主要为肾脏和中枢神经系统，作用可能与维持器官功能有关。在乙酰转移酶作用下烷基甘油磷酯乙酰化为乙酰烷基甘油磷脂，然后再由特异性的磷酸水解酶催化水解为乙酰烷基甘油，随后对二硫苏糖醇不敏感的CDP-胆碱磷酸转移酶以它为底物最终生成PAF（见图1）。
Fig. 1 PAF合成的新生途径
Alkyglycerophosphate acetyltransferase:酰基甘油磷酸盐乙酰转移酶
Phosphohydrolase: 磷酸水解酶
Cholinephosphotransferase: 胆碱磷酸转移酶
修饰途径主要是病理条件下由炎性细胞合成PAF的主要途径：修饰途径的前体底物为Sn2位上带有长链脂肪酰基的磷脂甘油胆碱，它在磷脂酶A2 (PLA2) 的作用下， Sn2位上酯键断裂或脱酰基，生成无活性的Lyso PAF和长链不饱和脂肪酸。Lyso PAF的Sn2位在乙酰转移酶的作用下被乙酰化生成PAF，后者经环氧酶和脂氧酶的作用生成前列腺素(PGs)及血栓素B2(TXB2)等,此过程可逆且伴有大量花生四烯酸生成,它的限速关键在于对Lyso PAF特异性的乙酰转移酶和乙酰 CoA的活性57。
Fig.2 PAF合成的修饰途径
PLA2 ： 磷脂酶A2
Lyso-PAF Acetyltransferase： Lyso-PAF乙酰基转移酶
3.1.2 PAF的代谢
PAF的代谢和合成是紧密联系的，组织中PAF的含量和它的生物活性的体现同样依赖于PAF的代谢途径的活化。限制PAF的生物学活性的酶主要是PAF特异性的乙酰水解酶（PAF-AH），它能切断Sn2位上的乙酰基，使PAF变成无生物学活性的Lyso-PAF。PAF-AH包括两个细胞内亚型（Ⅰ型和Ⅱ型）以及血浆中的分泌型PAF-AH。它们的生化特性和分子结构都不相同：Ⅰ型PAF-AH的结构与G蛋白类似，有两个催化α结构域和一个调节β结构域，它与微管的功能关系密切。血浆中和细胞内Ⅱ型PAF-AH 结构相似，都是单一多肽，功能也大抵相当，它们不仅能够降解PAF，也能降解有生物学活性的氧化磷脂物质58,59。而在哮喘、败血症、炎症等疾病中，血浆中的PAF-AH的变化尤为显著，所以它是病理研究的重点。另有研究表明，PAF的降解与细胞表面的PAF受体的表达联系密切，PAF受体基因敲除小鼠和野生型小鼠相比，PAF降解速度下降了近一半。野生型小鼠巨噬细胞PAF内化的速度极快，其内化半衰期约为1分钟。如果使用PAF降解抑制剂使PAF含量增多，会引起细胞表面PAF受体表达增加以及内化量增加，同时也增加胞外PAF-AH的量，从而通过胞内和胞外两种机制同时进行PAF的代谢60。
3.2 PAF的受体及信号转导机制
PAF参与多种生物学功能的信号转导，被认为是一种重要的第二信使物质，它通过结合效应细胞表面的特异性PAF受体发挥作用。PAF受体属于G蛋白偶联受体（GPCRs）超家族成员之一，含有七次跨膜结构域。放射受体配基结合实验证实人的血小板表面含有两种亲和力不同的PAF受体，PAF引起的血小板的活化主要是PAF与其中的高亲和力位点结合后作用的结果；而大鼠的血小板对PAF的反应不敏感，只含有低亲和力PAF结合位点。随后又证明多种细胞表面都含有特异性的PAF结合位点，如平滑肌细胞、心肌细胞、中性粒细胞、单核巨噬细胞、嗜酸性细胞、内皮细胞、Kupffer细胞等。近年来，在对PAF受体的分布和功能的研究中发现PAF不仅存在于细胞膜表面，也存在于细胞核内，胞核内的PAF受体被激活可引起cAMP的降低及核内钙离子的增加，激发可诱导型NO合酶及COX-2的基因表达，增加NF-κB对DNA的结合活性以及胞外信号调节激酶的磷酸化61,62。
多种实验研究均证实了PAF受体在的信号传导中的重要性，目前已知Ca2+、cAMP、IP3和DAG都充当PAF信号传导的第二信使，从而引起蛋白激酶的活化，如丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)、蛋白激酶C(PKC)、磷脂酰肌醇（-3）激酶（IP3K）、蛋白酪氨酸激酶和G蛋白受体激酶等；同时它还可诱导磷脂酶（PLC、PLD、cPLA2）等的活化。但迄今为止，对于其激活转录因子和诱导基因表达机制仍不明确。
Fig3. PAF受体胞内信号传导通路
(1)MAPK信号传导通路
MAPK家族在胞内信号从膜到核的酶级联反应中扮演着重要的角色，它可以被多种胞外刺激通过受体酪氨酸激酶或G蛋白偶联受体所活化。MAPK信号转导通路包含三个高度保守但功能各异的亚族：细胞外信号调节激酶(extracellular-signal regulated protein kinase, ERK)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun amino-terminal kinase, JNK)/应激激活蛋白激酶(stress-activated protein kinase, SAPK)、p38和ERK5/BMK1 (big MAP kinase 1) ，它们都能在PAF的刺激下发生磷酸化。有趣的是不同的动物种属或不同的细胞中PAF受体似乎存在多条激活MAPK的途径。
在稳定表达PAF受体的CHO细胞中，PAF能够活化ERK，激活胞浆磷脂酶A2，促进花生四烯酸代谢产物的释放63。 Lefkowitz等在进一步研究该细胞中PAF引起ERK活化与G蛋白的关系时发现，Ga0和GaI的活性可被百日咳毒素（PTX）特异性地抑制，使a和βγ亚基保持在非活化三聚体状态，从而阻碍下游信号的传导，而Gβγ 对ERK没有直接作用，说明只有通过α亚基的活化才可能激活ERK。Gai介导的ERK磷酸化需要Gβγ以及Shc, Grb2, Sos, 和Ras的活化64，可是PAF激活ERK与Ras等小G蛋白的状态无关，但需要PKC的活化，提示在CHO细胞中PAF诱导的ERK磷酸化可能是通过活化Ga0蛋白而使下游信号发生级联反应的65。此外，PAF还可激活Gaq/11，进而活化p38通路，这一激活途径是PTX非特异性的，其作用强度弱于ERK66。
在中性粒细胞中也有PAF激活p38和p44ERK1/p42ERK2的报道，并且这种刺激作用是瞬时发生的，大约在PAF刺激后1－2分钟内达到峰值，其中p38激活途径也是PTX非特异性的,它活化的程度和速度均强于p44ERK1/p42ERK2。特异性的p38抑制剂SK&F 86002可降低PAF刺激的中性粒细胞的粘附和趋化作用67。在中性粒细胞中PAF主要通过活化对百日咳毒素非特异性的G蛋白，从而磷酸化类Src样的激酶和PI3激酶使小GTP酶Ral, Ras等激活，再进一步激活Ras-Mek-Erk通路的，这与PAF在CHO细胞中的激活信号通路的途径不同。
Arbabi等发现PAF作用于人嗜酸性粒细胞可引起p38的快速活化，并且这种作用具有明显的钙依赖性68。Milie等报道嗜酸性粒细胞在PAF刺激下P42ERK2的活化而非P44ERK1，并且这种作用是通过活化PI3激酶（PI3K）、酪氨酸激酶以及增加胞内钙离子等因素协同作用的结果， PKC的抑制对该通路的活化没有影响69，说明在人的嗜酸性粒细胞中p42ERK2 和p44ERK1的调节机制存在差别。
(2)PLC、PI3K、PTKs的活化
PAF受体属G蛋白偶联受体超家族，在G蛋白家族中Gi、Gq、Go、Gp(G11、G14、G15、G16)、Gz与活化PLC有关，其中Gi、Go、Gz对PTX敏感，而Gq、G11、G14、G16对PTX不敏感,但能有效地活化PLCβ。PAF激活PLC可通过PTX敏感与不敏感G蛋白两种途径实现。研究证实，在中枢神经系统，PAF与星型胶质细胞及内皮细胞相应受体结合后，激活PLCβ产生IP3、DAG，并使钙离子内流，进而活化PKC。此外，也可通过PTKs激活PLCγ，且其后钙离子通道的开放较PLCβ持久。
最早认为，PTKs仅是生长因子受体在细胞内的信号传导中介，近来发现，它也涉及G蛋白偶联受体的信号转导，如PAF可诱导CHO细胞株胞内某些蛋白质酪氨酸磷酸化。PLCγ及PTKs家族成员Fyn、Lyn、PP60c、Src等均含有SH2和SH3结构域,这有利于PAF诱导激活PTKs后的底物蛋白质快速磷酸化,此过程能被PAF拮抗剂阻断。目前已知,在中枢神经系统,PTKs途径涉及到PLA2、PLC、PLD、PI3K、MAPK等多种酶的活化。如在中枢神经元中PAF通过Gβγ激活PTKs，随后使PI3K的ｐ85调节亚单位发生酪氨酸磷酸化，进而使磷脂酰肌醇磷酸化，产物磷脂酰肌醇(3,4,5) 三磷酸酯(IP3)能使PKC单体(PKCζ)活化70。在热损伤的大鼠中性粒细胞的氧自由基的生成增加，其机理与PAF引起PTK-Lyn和MAPK-ERK1/2的活化有关，并受到钙离子内流增加的影响；PTK的抑制剂AG556和MAPK抑制剂AG1478都可以完全阻止相应的下游信号转导通路，并对氧自由基生成的抑制达66％左右，但是它们对钙内流的增加没有作用；单用钙离子拮抗剂地尔硫卓对PTK和MAPK通路均无影响，但仍可抑制37％左右的氧自由基生成。PAF受体拮抗剂则几乎可完全抑制PTK-Lyn和MAPK-ERK1/2通路，阻止两者胞内的下游信号转导，同时降低钙内流的增加，从而阻止热损伤大鼠中性粒细胞氧自由基的生成71。
(3)小G蛋白的活化
近期关于PAF诱导小G蛋白活化的研究已有多例报道，PAF刺激人中性粒细胞、巨噬细胞后可发现小G蛋白－Ras、Rap1和Ral的活化，并且它们的活化与中性粒细胞与内皮细胞之间的粘附、呼吸爆发，以及巨噬细胞中补体介导的吞噬作用相关72-74。PAF引起Ras、Rap1和Ral 的活化是瞬时发生的，大约一分钟即可达到峰值。它们在随后的信号传导中所表现出的作用联系密切，如Ras和Rap1都可促进Ral特异性的鸟嘌呤核苷酸转换因子（Ral-GEFs）的活化，进而激活Ral75。PAF诱导的Ral的活化是PTX非特异性的，并需要类Src样激酶和PI3K的介导，而Ras的激活虽也需类Src样激酶的活化，但与PI3K的作用无关。值得提出的是PKC和MEK均不参与PAF引起的Ral 和 Ras 的活化74。Rap1主要受PLC功能的控制，PAF可活化PLC，继而引起胞内钙离子和DAG的增加，Rap1随后即会被激活。但是耗竭胞内钙或阻断PLC的功能后，仍有部分Rap1可被PAF激活，所以可能存在另外的途径来调节Rap1的活化73。尽管已发现Ras和Rap1都可以通过结合Ral-GDS的C末端活化Ral，但PAF激活Ral后的具体生物学功能仍不明确76，只是提出由于它结合PLD，所以可能参与磷脂类物质信号传导途径有关77。
(4)蛋白酪氨酸激酶途径（Jak/STAT pathway）
Janus激酶/信号传导与转录活化因子途径（Jak/STAT pathway）是细胞因子受体传导胞内信号的重要机制，目前已发现有四种哺乳类动物的Jak激酶（Jak1,Jak2,Jak3,和Tyk2）以及七种STAT。Jak/STAT途径的一个重要特征是它的快速活化，它们能够在相应的细胞因子受体刺激后1－5分钟内活化，随后发生STAT同源性和异源性的二聚化，细胞核转位，最终引起特异的基因转录的活化，新近的研究发现它与G蛋白偶联受体的信号转导的关系密切。PAF可引起人单核细胞系U937和MonoMac－1的Tyk2激酶酪氨酸快速磷酸化，PAF激发Tyk2激酶的快速磷酸化同样表现在瞬时转染了人PAF受体和Tyk2激酶cDNAs的COS-7细胞。Tyk2激酶的基因突变显示它的N末端对于结合PAF受体至关重要，一旦激活后，Tyk2激酶即可诱导下游信号传导与转录活化因子（STAT1、STAT2、STAT3和STAT5）的磷酸化。有趣的是PAF受体特异基因缺失而不能与G蛋白偶联时，PAF仍可活化Tyk2激酶和它的下游信号，说明PAF激活Tyk2激酶的活化是G蛋白非依赖的78。
(5)PLD和cPLA2的活化
PLD可水解磷脂酰胆碱产生磷脂酸（PA）和胆碱，PA可被磷酸水解酶进一步水解生成DAG。稳定表达PAF受体的CHO细胞株中，PAF激活PLD依赖于胞外钙离子的内流和PTKs的活化，PAF受体拮抗剂L659,989几乎可完全抑制PAF刺激的PLD的活化79。PAF诱导的PLD的活化还可激活PKCa 80，因为PKCa的活化是DAG依赖的。
胞浆磷脂酶A2（cPLA2）可水解Sn2位含有花生四烯酸的磷脂类物质水解，引起花生四烯酸的释放，促进PAF和PGs等的生成。cPLA2是MAPK的底物，它的Ser-505可被MAPK磷酸化，从而增加其酶活性。PAF引起的cPLA2的磷酸化可被MEK1/MEK2抑制剂PD098059所阻断，而不受p38抑制剂SB203580的影响。在小鼠腹腔巨噬细胞、人中性粒细胞和表达PAF受体的CHO细胞中都可观察到PAF刺激后cPLA2活化，以及AA类物质的释放。但是PAF只能瞬时增加cPLA2的活性，联用CSF-1作为协同激动剂时，可保持cPLA2的Ser-505持续磷酸化，致使钙离子的活化增强和AA类物质的不断生成81。PAF引起的cPLA2的活化亦与PLD的功能有关，在中性粒细胞中PLD水解产物PA和DAG可激活cPLA2促进AA和PAF的生成82，由此可能产生PAF在炎症反应中的正反馈调节，从而加重局部炎症。
四、PAF拮抗剂的研究
文献报道的第一个PAF受体拮抗剂是PAF类似物CV3988,它能很好地抑制PAF对血小板的凝聚作用，但由于口服活性很低，且在高浓度时成为激动剂和具有溶血性，因此其临床应用受到限制83。随后，研究开发出大量的PAF受体拮抗剂，根据其结构和来源基本可分为三大类：(1)PAF结构类似物。主要有依据PAF天然骨架设计的CV3988、CV6209等。 (2)天然化合物。是一些从自然界存在的物质中分离提纯的物质。如从银杏中分离出的萜烯类化合物，如银杏内脂B(BN52021)，从海风藤中提取的海风藤酮，从川芎中提取的川芎嗪等84。 (3)人工合成化合物。主要是天然化合物的衍生物、含有季铵盐的PAF结构类似物和含氮杂环化合物，如MK-287、TCV309、WEB2086、Y24180等。
随着人们对PAF的生理及病理生理更深入的了解，PAF拮抗剂的研究也取得了相应的进展，已有大量具有PAF拮抗作用的化合物进入临床研究。目前正在进行Ⅲ期临床实验的化合物有BN5202185、Y2418086、Lexipafant,处于二期临床研究的化合物较多，如WEB2086、CV3988、TCV309等，它们在抗炎、抗哮喘、抗热休克、抗过敏等方面都发挥一定的作用。
五、展望
近年来,有关PAF在不同脏器组织的病理生理功能、PAF受体以及受体后信号转导方面研究取得了令人瞩目的成果，然而，还有以下问题尚待解决：①PAF在炎症反应中与各种神经递质、细胞因子、粘附分子的关系；②PAF受体是否存在其它种类或亚型，细胞膜与胞内受体结构和功能是否存在不同；③病理状态下，PAF受体的调节机制；④PAF受体拮抗剂的临床合理有效应用。目前，已成功建立起的PAF受体转基因及基因敲除动物模型有助于PAF功能的进一步研究。一些选择性强、效价高、副作用低的PAF拮抗剂的开发，不仅为研究PAF的致病机制，而且在临床治疗、预防疾病方面都具有广阔应用前景。
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摘 要：血小板活化因子 (Platelet activating factor， PAF) 是一种具有广泛生物活性的内源性磷脂类介质，可由肥大细胞、内皮细胞、巨噬细胞、多形核白细胞等细胞产生。另外，体内多种细胞（如内皮细胞、巨噬细胞）表面含有特异性的PAF受体，PAF与其受体结合从而产生一系列的受体后效应。生理状态下，体内PAF主要参与细胞内信息传递和调节，与生殖、胎儿发育、分娩和肾脏的作用联系紧密。在病理情况下，PAF可以促进血小板、中性粒细胞聚集，细胞脱颗粒、释放氧自由基（OFR）、肿瘤坏死因子 (TNF)、白介素 (ILs)、花生四烯酸及代谢产物，从而增加血管通透性，促进血栓形成，诱发平滑肌收缩，在炎症、哮喘、心脑血管微循环障碍、胃肠粘膜损害等一系列相关疾病的发生发展过程中发挥重要作用。近年对它的基础生物学方面的研究不断深化，它的受体信号转导机制逐步得到阐明，本文将对PAF的生物学活性、受体信号转导机制、及拮抗剂的开发应用等方面的研究概况作一综述。
关键词：血小板活化因子；PAF受体；信号转导；拮抗剂
一、PAF的构效关系
1、 PAF的结构
1972年，Benveniste等1发现嗜碱性粒细胞在被IgE攻击后能产生一种可使血小板活化、聚集、释放组胺和5-羟色胺的可溶性脂质，称之为血小板活化因子。其后虽然证明PAF的作用远不止活化血小板，但命名一直沿用至今。同期，Muirhead等2从大鼠肾髓质细胞中分离出一种类似于PAF的脂质，因该物质在肾动脉夹所致大鼠高血压模型中，具有降压作用，故称之为抗肾性高血压脂质。1979年证实2-4，这两种物质具有相同结构，即它们为同一物质。其化学名称为：1-醚基- 2- 乙酰基- Sn- 甘油－ 3- 磷酸胆碱 (Sn代表甘油骨架)，分子量为1100，因在甘油骨架1位和2位上分别有醚键和乙酰键，故又有PAF 酰醚之称。
2、 PAF的构效关系
在对PAF的配基进行了广泛研究之后，目前认为PAF主要存在下列构效关系5：(1)其Sn1位上的疏水基团对PAF活性的发挥具有重要作用，C16～C18链可有效的引起血小板活化，降低血压及血小板减少，而C14链可使支气管收缩；(2) Sn2位的乙酰基对PAF的生物学活性起决定作用，若PAF在PAF乙酰水解酶 (PAF AH) 的作用下，水解乙酰基为羟基，则PAF完全失活；(3)Sn3位上的磷酰胆碱基团对生物活性很重要，它的最佳长度是从氨基端开始烷基数ｎ=3；(4)甘油基的空间螺旋结构特性及长度至关重要，而与取代基的空间排列无关，PAF有左旋和右旋两种异构体，但只有天然形成的左旋异构体具有生物学活性6。另外，PAF的疏水部分与细胞膜表面结合，脂肪链插入膜内，从而导致膜流动性和膜活动性改变7,8。
3、 PAF的类似物
与PAF结构类似的某些物质，也具有与PAF相似的生物学活性：如抑制淋巴细胞的趋化、减轻炎症反应、降血压、促使血小板聚集等，但其活性远较PAF低，并易被PAF拮抗剂阻断。此类物质主要有：缩醛卵磷脂、缩醛脑磷脂、新生途径中的PAF前体(Lyso PAF)、PAF氧化样磷脂。值得注意的是， PAF氧化样磷脂是由自由基刺激产生的，不是通过酶促反应生成，其生物活性虽不如PAF强，但当氧自由基强烈攻击磷脂前体时，可大量产生，并同样能发挥较强的生物学活性作用，故在可产生氧自由基的炎性组织，缺血或再灌注损伤部位，它的作用仍不可忽视9,10。近年来发现，在引起动脉粥样硬化的形成中起着关键作用的氧化低密度脂蛋白中也含有类PAF的磷脂类物质，它能与多种细胞表面的PAF受体结合并产生相应的下游信号， 刺激巨噬细胞、单核细胞等的游走和释放炎性介质，导致血管壁泡沫细胞的形成，产生动脉粥样硬化的早期症状11。
二、PAF的生理、病理作用
2.1 PAF的生理作用
PAF是生理状态下一种极为重要的介质，和生殖、胎儿发育、分娩的作用联系紧密。猿猴在发情期其精子中PAF的含量较平时明显增高，人的精液中PAF含量高则受孕几率大。同时检测到人精液中还含有与PAF的灭活相关的Lyso-PAF乙酰基转移酶和PAF乙酰水解酶，在受孕时如果去除它们，则PAF的含量增加，精子的活动能力和受孕几率也都明显增加，PAF受体拮抗剂可以降低精子的活性，阻止顶体反应，抑制卵母细胞的受孕12。鼠的胚胎PAF的生成量与胚胎发育成熟的时间关系密切，正常情况下PAF随着胚胎的发育以恒定速率（约为1.4-1.9）生成，在八倍体期和桑椹胚期它的生成速率猛增至7；同时在双细胞期胚胎的PAF 受体的表达量最高，随后逐渐下降，直至桑椹胚胎期，表达量再度增高13。PAF在妊娠后阶段的重要性也得到证实，PAF可使基质金属蛋白酶1（matrix metalloproteinase-1，MMP-1）的表达增加，从而加速子宫颈的胶原溶解，促进分娩期子宫颈的快速成熟14。从分娩妇女的羊水中发现PAF，而非妊娠妇女中却没有发现。当PAF在胎儿肺与胎儿其他组织的合成增高时，母体血浆中的PAF乙酰水解酶迅速降低，这可解释分娩妇女羊水中PAF水平较高的原因15。
2.2 PAF的病理作用
PAF涉及许多疾病的病理机制，体内许多细胞如嗜酸、嗜碱、嗜中性粒细胞、单核和巨噬细胞、肥大细胞、血小板和内皮细胞等在一定条件刺激下均可产生PAF，促进血小板和中性粒细胞等的聚集，并促使这些细胞产生肿瘤坏死因子、白介素、超氧化物等，介导疾病的发生发展。近年来在对心脑血管、肺、胰腺、胃肠道等器官疾病的研究中，发现PAF发挥着重要作用。
2.2.1、 PAF在缺血性心血管疾病中的作用研究
心脏本身可以产生PAF，并可表达其受体,PAF作为细胞内和细胞间的沟通信使，可通过调节心肌收缩的节律性和影响冠状动脉收缩导致心肌缺血、心肌梗死和心性猝死16。PAF主要依赖以下机制介入心脏功能：①影响心肌细胞的膜电位。PAF可抑制Na+，K+-ATP酶的功能，通过抑制微弱内向整流K+通道（The Weakly Inward rectification K+ channels，TWIK）相关的酸敏感钾通道[TWIK-related acid-sensitive K(+) background channel (TASK-1)]引起心肌自律性异常、动作电位的平台期阻滞以及早后除极的延缓，从而导致室性心率失常，这一效应可被PAF受体拮抗剂BN50739和TASK-1抑制剂所阻滞17，18。②促进血小板的聚集和活化。临床观测到无ST增高的急性冠脉综合症的病人对PAF的刺激表现出强特异性和敏感性，其血浆中血小板的聚集速度和强度远远超过正常人19。而在病灶部位炎性细胞浸润后，PAF则可通过自分泌和旁分泌效应进一步破坏内皮细胞基底膜上的磷酸化蛋白多糖，使血小板粘附，形成血栓块，最终在该部位出现纤维蛋白沉积20。这对于血栓和动脉粥样硬化的形成起着重要的作用。③活化中性粒细胞。PAF对中性粒细胞具有趋化作用，促使它向心肌缺血及梗死区游走、聚集，释放溶体酶、AA、白三烯及氧自由基，造成“氧灌注无血流区”，加重心肌缺血及再灌注损伤。PAF与中性粒细胞表面相应的受体结合后，引起钙离子内流的增加，上调CD11/CD18整合素复合物含量，使中性粒细胞沿着血管壁滚动，并与表达免疫蛋白超家族粘附分子的内皮细胞表面强烈粘附，同时在趋化因子的作用下穿过细胞间隙，侵入病灶部位，加重局部炎症。实验证实以PAF受体拮抗剂TCV-309灌注心肌缺血动物，中性粒细胞浸润的现象能得到较好的控制，灌注组的体动脉血压和动物存活率明显高于造模组，心脏功能也可维持较长时间。因此认为PAF活化中性粒细胞在心肌缺血再灌注性损伤引起的心功能障碍中起到不容忽视的作用21。④调节内皮细胞功能。内皮细胞表面存在PAF受体结合位点，所以由内皮细胞或者其他炎性细胞释放的PAF参与调节内皮细胞的多种功能。PAF刺激人血管内皮细胞产生多种血管活性物质（如PGs、TXA2和纤维蛋白酶等）直接影响冠状微血管舒张功能22。同时PAF还能引起内皮细胞的细胞骨架的改变导致细胞孔隙的增大，如缺血心肌细胞培养上清能促进PMN穿透心肌内皮细胞，其原理在于它促进内皮细胞释放PAF和氧化性物质，从而改变细胞骨架，增大内皮细胞表面E选择素和细胞间粘附分子－1的表达23，这些变化利于PMN由滚动转为粘附状态，进而穿过内皮细胞，侵入病变组织。血管新生对于心肌梗死等疾病发生后的心脏修复有着重要意义， TNFa和血栓形成素等多肽介质所引起的血管生成依赖于内皮细胞PAF的释放，所以 PAF可能为这些多肽的第二介质。同时PAF的某些生物活性类似血管内皮细胞生长因子(VEGF)，可直接刺激内皮细胞发生迁移和释放NO，增加血管的通透性，促进新血管生成 24,25。
2.2.2、脑缺血病理过程中PAF对脑功能损害
当脑组织受到外部细胞因子和缺血、缺氧等刺激时，会导致ATP的消耗，进而可促进磷酸盐乙酰转移酶（AGP）、LysoPAF乙酰转移酶的活性，增加了脑中再生途径的PAF生成。而PAF作为炎性因子又可刺激脑内皮细胞的活化，引起胞内钙离子的增加，促进转磷酸胆碱酶（AAG）的活性，促进大脑内皮细胞以新生途径合成PAF， 所以在脑缺血病理状态下，PAF的生成是过度产生的26。PAF参与脑缺血病理过程各个环节，从血栓形成到缺血损害，PAF均起重要作用。首先，PAF可通过促进血栓形成，降低脑血流量，增加脑耗氧量，加重脑水肿，改变血脑屏障的功能。它可增加脑血管内皮细胞的通透性，改变局部脑血流量；刺激内皮细胞中与粘附相关的P选择素、E选择素和粘附分子－1等表达，引起血小板、中性粒细胞活化和粘附27，促使其释放血管活性物质如组胺、血清素、血栓烷Ａ和白三烯等，引起血管栓塞或血管通透性增加，加重脑水肿；促进花生四烯酸类物质的释放和氧活性物质的产生，增加血脑屏障的通透性，加重炎症反应28 29。实验中可见静脉灌注PAF可引起大脑皮质区血管淋巴细胞的粘附及通透性的增加，并呈剂量依赖效应，1uMPAF所产生的血脑屏障的损害程度与脑缺血缺氧后再灌注的结果相似，而这种效应可以通过静脉注射PAF受体拮抗剂WEB2086来降低 30。其次，PAF可增加神经细胞内钙离子浓度,促进兴奋性神经递质和炎性介质的释放，扰乱细胞膜功能。脑缺血时PAF可通过与之特异受体相偶联的G蛋白结合，激活磷脂酶C(PLC)，从而促进磷脂肌醇代谢增强，使二酰基甘油(DG)及三磷酸肌醇(IP3)水平增高，最终引起神经细胞内Ca2+增加。钙内流动增加抑制转磷酸胆碱酶（AAG）的活性，并激活磷脂酶A2，使得脑缺血状态下PAF含量进一步增加；同时过量Ca2+可以促进兴奋性氨基酸（喹啉酸、门冬氨酸等）的释放，引起蛋白激酶C的活化，促使毒性自由基地生成；使线粒体氧化磷酸化脱偶联，发生功能障碍，抑制细胞呼吸，导致神经细胞膜结构改变，离子通道受损及跨膜信息传递紊乱，发生不可逆性损害31。
2.2.3、对中枢神经系统的影响
在中枢神经系统，PAF与花生四烯酸代谢密切相关，共同参与了神经细胞损伤与修复，突触再生与重塑及海马神经元长时程增强（LTP）。生理条件下，中枢神经系统PAF作为调质，主要通过突触前受体调节多种神经递质的释放，如抑制突触膜γ-氨基丁酸（GABA）受体通道开放。此外，其还参与了胎脑发育期神经细胞的增殖与分化32。病理状态下，PAF对中枢神经系统的损害机制是多方面的：①PAF在兴奋毒性氨基酸引起的细胞凋亡过程中是由膜磷脂前体细胞生成的33，它在脑中的含量增加会激活PI3K，加重神经元细胞的Ca2+超载，刺激线粒体渗透性转移和细胞色素C的生成，诱导环加氧酶 （COX2）的产生，参与癫痫发作过程中突触的重组。PAF同时还能调节神经元中谷氨酸盐受体和***A受体的功能，增加兴奋性氨基酸诱导细胞凋亡的毒性。最终导致线粒体功能缺失和神经细胞的不可逆性损伤。②花生四烯酸代谢及活化PI3K均伴随自由基的产生，可导致脂质过氧化级联反应、DNA多核苷主链断裂、蛋白质交联等34,35。③介入信号传导通路，促进即早基因的表达。在神经元中，PAF至少有三个结合位点：一个突触小体结合位点和两个微粒体结合位点。PAF与突触小体上的G蛋白偶联受体相结合会促进兴奋性谷氨酸盐的释放，抑制长时程增强(LTP)，致学习与记忆功能障碍，因此被认为是一个潜在的LTP逆行信使36；当它与微粒体上的受体结合时则可活化JNK、ERK和p38有丝分裂素活化蛋白激酶，促使即早基因的强表达。JNK和ERK又可以上调即早基因和COX2的表达。PAF受体拮抗剂BN50730可抑制培养的大鼠海马组织p38、JNK和ERK激酶的活化。脑内用BN50730预处理可以降低海马回电惊厥性休克所引起的Zif-268和C-fos基因表达，并能抑制COX2的表达，减轻神经细胞的变性、凋亡和坏死37。
2.2.4、PAF对胰腺功能的影响
急性胰腺炎的组织内PAF的含量明显增高，同时胰腺内皮细胞的PAF受体表达增加，PAF被认为是在胰腺炎病理过程中重要的炎性介质，它能够引起机体全身性效应，导致微循环障碍和多器官的衰竭。由蛙皮素诱导的急性胰腺炎模型中如果联用PAF作为刺激剂，可见胃十二指肠和肠系膜上动脉的血流量急速下降，血浆淀粉酶和脂肪酶水平也大大增高，组织学检测发现广泛而显著的弥散性出血和炎性细胞浸润38，说明PAF在急性胰腺炎中可进一步使器官发生循环障碍，最终导致多器官衰竭。虽然许多实验证实PAF参与急性胰腺炎的发病过程，但其确切的作用机制还不甚明确，可能有以下几个方面：①PAF使胰腺腺泡细胞内钙离子增加，从而刺激和活化胰酶，参与胰腺自身消化过程39；②PAF可上调内皮细胞粘附分子I(ICAM-I)及整合素β2的表达，增强中性粒细胞与内皮细胞的粘附作用，促进中性粒细胞聚集并大量释放其他炎性介质，增强炎性反应，导致胰腺内皮细胞损伤40,41； ③PAF可以增加肠上皮细胞的通透性，导致局部水肿的发生，促进中性粒细胞脱颗粒，释放炎症介质，破坏肠道屏障功能，肠道细菌通过肠系膜淋巴结转移到远处器官，造成多器官功能障碍42,43； ④PAF引起心输出量降低，血液粘滞性增加，毛细血管通透性增加，胰腺血流减少，导致胰腺组织的破坏44。许多正在进行开发研究的PAF受体拮抗剂对于胰腺炎的治疗作用也证明了PAF与胰腺炎发病有关。Lane等用特异性的PAF受体拮抗剂昔帕派（Lexipafant）对抗急性胰腺炎，结果发现它不仅可以减少急性胰腺炎的局部炎症反应，同时对急性胰腺炎导致的全身性病变也有抑制作用，它能够降低肺中的髓过氧化物酶和血清中细胞因子TNFa、IL1和淀粉酶等的活性，对胰腺炎的并发症有良好的抑制作用45，目前为止，在美国已经成功完成Lexipafant急性胰腺炎的三期临床工作。赵40等人在研究中证实PAF可通过中性粒细胞的聚集诱导粘附分子的表达，这些粘附分子在急性胰腺炎的并发症中发挥着不容忽视的作用，PAF受体拮抗剂不仅可降低粘附分子的表达量，而且还能抑制炎症反应的发生。
2.2.5、PAF在胃肠道炎症反应中的作用
PAF在胃肠道急性炎症的发病中的作用还不是非常明确，但是在慢性胃炎和幽门螺旋杆菌引起的胃肠道病变的活组织检查时都发现有PAF和它的前体物质，食管炎和糜烂性胃炎中PAF的生成也明显增高46 。PAF引起胃肠道疾病的主要机制在于：①PAF促进上皮细胞分泌粘附分子，诱发炎性细胞的浸润，增加血管通透性，促进水肿的发生，引起粘膜循环障碍47。 PAF可引起空肠、结肠、回肠和胃基底膜的收缩，同时增加十二指肠、空肠、回肠、结肠和肠系膜的血管通透性，引起肠黏膜微循环障碍，静脉瘀血，黏膜水肿，炎性细胞的浸润乃至发生黏膜的坏死、出血和溃疡的形成48。②PAF刺激胃壁细胞分泌胃酸，加重对胃粘膜的损害。Sobhani等人利用PAF受体拮抗剂可抑制PAF与胃壁细胞上特异性受体结合，减少胃酸的分泌，保护胃粘膜功能49。③PAF通过活化花生四烯酸类物质的代谢，促进氧自由基的产生。氧自由基可与胞膜上的酶和受体进行共价结合，或直接引起膜多聚未饱和脂肪酸（PUFA）的过氧化而影响膜结构，致使膜的孔隙扩大，通透性增加，毛细血管内皮细胞损伤，加重炎症反应，导致细胞广泛性损害和病变。有研究报道，应用PAF受体拮抗剂能明显改善内毒素休克所致的胃黏膜缺血，减轻出血性休克中氧自由基所引起的胃和十二指肠的形态学上的损伤50,51。
2.2.6、PAF在哮喘中的作用
临床研究证实哮喘患者血浆中PAF含量明显高于正常人，而且他们的痰液和支气管渗出液中都有高浓度的PAF，其肺部PAF受体的表达也大大增加，高表达的PAF受体能够增强乙酰甲胆碱诱导的气道高反应性作用的强度52。细胞培养研究发现支气管上皮细胞、肺泡巨噬细胞、肺血管内皮细胞和平滑肌细胞均可合成PAF。PAF能引起支气管收缩,支气管粘膜粘液分泌亢进,气道高反应性,血管壁通透性增加,肺水肿和肺动脉高压等病理生理改变。吸入PAF后可致肺部气体交换障碍，血管通透性增高，导致肺水肿的形成，呼吸系统抗性的增强和外周血中性粒细胞的增加53。嗜酸性粒细胞被认为是导致哮喘病气道病变最重要的效应细胞54。在急性肺炎中PAF能够快速引起嗜酸性粒细胞钙离子内流的增加，中性粒细胞的变形和趋化性的增强，诱导毛细血管内皮细胞表面粘附分子配体ICAM的表达增加，从而促使嗜酸性粒细胞和中性粒细胞在肺微血管发生快速聚集，与炎症部位毛细血管粘附增加55。活化的嗜酸性粒细胞会释放相应的炎性介质，包括高碱性细胞毒蛋白、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白等，这些蛋白对上皮细胞具有显著的细胞毒性，可能与上皮细胞脱落坏死有关。Federico等报道，PAF不仅可以通过募集肺部嗜酸性粒细胞，继发炎症反应，还可激活花生四烯酸的5-脂氧酶代谢途径，促使肺部产生TXA2和LTs，使呼吸道上皮细胞损伤，内皮细胞通透性增加，促进支气管收缩和肺水肿的形成，增加局部缺血的程度并使呼吸道气流产生严重障碍56。
三、PAF的代谢特征、受体信号转导机制
3.1 PAF的代谢特征
3.1.1 PAF的合成
人和哺乳动物的多种细胞均能产生PAF,如嗜酸性粒细胞(Eos)、嗜碱性粒细胞(Bas)、多形核白细胞(PMN)、单核－巨噬细胞(Mon M )、肥大细胞(Mac)、平滑肌细胞、血小板(PL)、内皮细胞(EC)、以及肾实质、髓质细胞等。静止细胞不合成PAF,只有在激动剂的刺激下才合成PAF,其激动剂主要有:白三烯(LTs)、TNF、白介素 (IL)、内毒素、三磷酸腺苷(ATP)、组胺、缓激肽、OFR、免疫球蛋白、补体片断及凝血酶、胶原等。
PAF在体内的合成途径主要有两条: 新生途径(De novo pathway) 和修饰途径(Remodeling pathway)。新生途径是生理条件下合成PAF的主要途径,它的合成前体底物为烷基甘油磷酯，合成部位主要为肾脏和中枢神经系统，作用可能与维持器官功能有关。在乙酰转移酶作用下烷基甘油磷酯乙酰化为乙酰烷基甘油磷脂，然后再由特异性的磷酸水解酶催化水解为乙酰烷基甘油，随后对二硫苏糖醇不敏感的CDP-胆碱磷酸转移酶以它为底物最终生成PAF（见图1）。
Fig. 1 PAF合成的新生途径
Alkyglycerophosphate acetyltransferase:酰基甘油磷酸盐乙酰转移酶
Phosphohydrolase: 磷酸水解酶
Cholinephosphotransferase: 胆碱磷酸转移酶
修饰途径主要是病理条件下由炎性细胞合成PAF的主要途径：修饰途径的前体底物为Sn2位上带有长链脂肪酰基的磷脂甘油胆碱，它在磷脂酶A2 (PLA2) 的作用下， Sn2位上酯键断裂或脱酰基，生成无活性的Lyso PAF和长链不饱和脂肪酸。Lyso PAF的Sn2位在乙酰转移酶的作用下被乙酰化生成PAF，后者经环氧酶和脂氧酶的作用生成前列腺素(PGs)及血栓素B2(TXB2)等,此过程可逆且伴有大量花生四烯酸生成,它的限速关键在于对Lyso PAF特异性的乙酰转移酶和乙酰 CoA的活性57。
Fig.2 PAF合成的修饰途径
PLA2 ： 磷脂酶A2
Lyso-PAF Acetyltransferase： Lyso-PAF乙酰基转移酶
3.1.2 PAF的代谢
PAF的代谢和合成是紧密联系的，组织中PAF的含量和它的生物活性的体现同样依赖于PAF的代谢途径的活化。限制PAF的生物学活性的酶主要是PAF特异性的乙酰水解酶（PAF-AH），它能切断Sn2位上的乙酰基，使PAF变成无生物学活性的Lyso-PAF。PAF-AH包括两个细胞内亚型（Ⅰ型和Ⅱ型）以及血浆中的分泌型PAF-AH。它们的生化特性和分子结构都不相同：Ⅰ型PAF-AH的结构与G蛋白类似，有两个催化α结构域和一个调节β结构域，它与微管的功能关系密切。血浆中和细胞内Ⅱ型PAF-AH 结构相似，都是单一多肽，功能也大抵相当，它们不仅能够降解PAF，也能降解有生物学活性的氧化磷脂物质58,59。而在哮喘、败血症、炎症等疾病中，血浆中的PAF-AH的变化尤为显著，所以它是病理研究的重点。另有研究表明，PAF的降解与细胞表面的PAF受体的表达联系密切，PAF受体基因敲除小鼠和野生型小鼠相比，PAF降解速度下降了近一半。野生型小鼠巨噬细胞PAF内化的速度极快，其内化半衰期约为1分钟。如果使用PAF降解抑制剂使PAF含量增多，会引起细胞表面PAF受体表达增加以及内化量增加，同时也增加胞外PAF-AH的量，从而通过胞内和胞外两种机制同时进行PAF的代谢60。
3.2 PAF的受体及信号转导机制
PAF参与多种生物学功能的信号转导，被认为是一种重要的第二信使物质，它通过结合效应细胞表面的特异性PAF受体发挥作用。PAF受体属于G蛋白偶联受体（GPCRs）超家族成员之一，含有七次跨膜结构域。放射受体配基结合实验证实人的血小板表面含有两种亲和力不同的PAF受体，PAF引起的血小板的活化主要是PAF与其中的高亲和力位点结合后作用的结果；而大鼠的血小板对PAF的反应不敏感，只含有低亲和力PAF结合位点。随后又证明多种细胞表面都含有特异性的PAF结合位点，如平滑肌细胞、心肌细胞、中性粒细胞、单核巨噬细胞、嗜酸性细胞、内皮细胞、Kupffer细胞等。近年来，在对PAF受体的分布和功能的研究中发现PAF不仅存在于细胞膜表面，也存在于细胞核内，胞核内的PAF受体被激活可引起cAMP的降低及核内钙离子的增加，激发可诱导型NO合酶及COX-2的基因表达，增加NF-κB对DNA的结合活性以及胞外信号调节激酶的磷酸化61,62。
多种实验研究均证实了PAF受体在的信号传导中的重要性，目前已知Ca2+、cAMP、IP3和DAG都充当PAF信号传导的第二信使，从而引起蛋白激酶的活化，如丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)、蛋白激酶C(PKC)、磷脂酰肌醇（-3）激酶（IP3K）、蛋白酪氨酸激酶和G蛋白受体激酶等；同时它还可诱导磷脂酶（PLC、PLD、cPLA2）等的活化。但迄今为止，对于其激活转录因子和诱导基因表达机制仍不明确。
Fig3. PAF受体胞内信号传导通路
(1)MAPK信号传导通路
MAPK家族在胞内信号从膜到核的酶级联反应中扮演着重要的角色，它可以被多种胞外刺激通过受体酪氨酸激酶或G蛋白偶联受体所活化。MAPK信号转导通路包含三个高度保守但功能各异的亚族：细胞外信号调节激酶(extracellular-signal regulated protein kinase, ERK)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun amino-terminal kinase, JNK)/应激激活蛋白激酶(stress-activated protein kinase, SAPK)、p38和ERK5/BMK1 (big MAP kinase 1) ，它们都能在PAF的刺激下发生磷酸化。有趣的是不同的动物种属或不同的细胞中PAF受体似乎存在多条激活MAPK的途径。
在稳定表达PAF受体的CHO细胞中，PAF能够活化ERK，激活胞浆磷脂酶A2，促进花生四烯酸代谢产物的释放63。 Lefkowitz等在进一步研究该细胞中PAF引起ERK活化与G蛋白的关系时发现，Ga0和GaI的活性可被百日咳毒素（PTX）特异性地抑制，使a和βγ亚基保持在非活化三聚体状态，从而阻碍下游信号的传导，而Gβγ 对ERK没有直接作用，说明只有通过α亚基的活化才可能激活ERK。Gai介导的ERK磷酸化需要Gβγ以及Shc, Grb2, Sos, 和Ras的活化64，可是PAF激活ERK与Ras等小G蛋白的状态无关，但需要PKC的活化，提示在CHO细胞中PAF诱导的ERK磷酸化可能是通过活化Ga0蛋白而使下游信号发生级联反应的65。此外，PAF还可激活Gaq/11，进而活化p38通路，这一激活途径是PTX非特异性的，其作用强度弱于ERK66。
在中性粒细胞中也有PAF激活p38和p44ERK1/p42ERK2的报道，并且这种刺激作用是瞬时发生的，大约在PAF刺激后1－2分钟内达到峰值，其中p38激活途径也是PTX非特异性的,它活化的程度和速度均强于p44ERK1/p42ERK2。特异性的p38抑制剂SK&F 86002可降低PAF刺激的中性粒细胞的粘附和趋化作用67。在中性粒细胞中PAF主要通过活化对百日咳毒素非特异性的G蛋白，从而磷酸化类Src样的激酶和PI3激酶使小GTP酶Ral, Ras等激活，再进一步激活Ras-Mek-Erk通路的，这与PAF在CHO细胞中的激活信号通路的途径不同。
Arbabi等发现PAF作用于人嗜酸性粒细胞可引起p38的快速活化，并且这种作用具有明显的钙依赖性68。Milie等报道嗜酸性粒细胞在PAF刺激下P42ERK2的活化而非P44ERK1，并且这种作用是通过活化PI3激酶（PI3K）、酪氨酸激酶以及增加胞内钙离子等因素协同作用的结果， PKC的抑制对该通路的活化没有影响69，说明在人的嗜酸性粒细胞中p42ERK2 和p44ERK1的调节机制存在差别。
(2)PLC、PI3K、PTKs的活化
PAF受体属G蛋白偶联受体超家族，在G蛋白家族中Gi、Gq、Go、Gp(G11、G14、G15、G16)、Gz与活化PLC有关，其中Gi、Go、Gz对PTX敏感，而Gq、G11、G14、G16对PTX不敏感,但能有效地活化PLCβ。PAF激活PLC可通过PTX敏感与不敏感G蛋白两种途径实现。研究证实，在中枢神经系统，PAF与星型胶质细胞及内皮细胞相应受体结合后，激活PLCβ产生IP3、DAG，并使钙离子内流，进而活化PKC。此外，也可通过PTKs激活PLCγ，且其后钙离子通道的开放较PLCβ持久。
最早认为，PTKs仅是生长因子受体在细胞内的信号传导中介，近来发现，它也涉及G蛋白偶联受体的信号转导，如PAF可诱导CHO细胞株胞内某些蛋白质酪氨酸磷酸化。PLCγ及PTKs家族成员Fyn、Lyn、PP60c、Src等均含有SH2和SH3结构域,这有利于PAF诱导激活PTKs后的底物蛋白质快速磷酸化,此过程能被PAF拮抗剂阻断。目前已知,在中枢神经系统,PTKs途径涉及到PLA2、PLC、PLD、PI3K、MAPK等多种酶的活化。如在中枢神经元中PAF通过Gβγ激活PTKs，随后使PI3K的ｐ85调节亚单位发生酪氨酸磷酸化，进而使磷脂酰肌醇磷酸化，产物磷脂酰肌醇(3,4,5) 三磷酸酯(IP3)能使PKC单体(PKCζ)活化70。在热损伤的大鼠中性粒细胞的氧自由基的生成增加，其机理与PAF引起PTK-Lyn和MAPK-ERK1/2的活化有关，并受到钙离子内流增加的影响；PTK的抑制剂AG556和MAPK抑制剂AG1478都可以完全阻止相应的下游信号转导通路，并对氧自由基生成的抑制达66％左右，但是它们对钙内流的增加没有作用；单用钙离子拮抗剂地尔硫卓对PTK和MAPK通路均无影响，但仍可抑制37％左右的氧自由基生成。PAF受体拮抗剂则几乎可完全抑制PTK-Lyn和MAPK-ERK1/2通路，阻止两者胞内的下游信号转导，同时降低钙内流的增加，从而阻止热损伤大鼠中性粒细胞氧自由基的生成71。
(3)小G蛋白的活化
近期关于PAF诱导小G蛋白活化的研究已有多例报道，PAF刺激人中性粒细胞、巨噬细胞后可发现小G蛋白－Ras、Rap1和Ral的活化，并且它们的活化与中性粒细胞与内皮细胞之间的粘附、呼吸爆发，以及巨噬细胞中补体介导的吞噬作用相关72-74。PAF引起Ras、Rap1和Ral 的活化是瞬时发生的，大约一分钟即可达到峰值。它们在随后的信号传导中所表现出的作用联系密切，如Ras和Rap1都可促进Ral特异性的鸟嘌呤核苷酸转换因子（Ral-GEFs）的活化，进而激活Ral75。PAF诱导的Ral的活化是PTX非特异性的，并需要类Src样激酶和PI3K的介导，而Ras的激活虽也需类Src样激酶的活化，但与PI3K的作用无关。值得提出的是PKC和MEK均不参与PAF引起的Ral 和 Ras 的活化74。Rap1主要受PLC功能的控制，PAF可活化PLC，继而引起胞内钙离子和DAG的增加，Rap1随后即会被激活。但是耗竭胞内钙或阻断PLC的功能后，仍有部分Rap1可被PAF激活，所以可能存在另外的途径来调节Rap1的活化73。尽管已发现Ras和Rap1都可以通过结合Ral-GDS的C末端活化Ral，但PAF激活Ral后的具体生物学功能仍不明确76，只是提出由于它结合PLD，所以可能参与磷脂类物质信号传导途径有关77。
(4)蛋白酪氨酸激酶途径（Jak/STAT pathway）
Janus激酶/信号传导与转录活化因子途径（Jak/STAT pathway）是细胞因子受体传导胞内信号的重要机制，目前已发现有四种哺乳类动物的Jak激酶（Jak1,Jak2,Jak3,和Tyk2）以及七种STAT。Jak/STAT途径的一个重要特征是它的快速活化，它们能够在相应的细胞因子受体刺激后1－5分钟内活化，随后发生STAT同源性和异源性的二聚化，细胞核转位，最终引起特异的基因转录的活化，新近的研究发现它与G蛋白偶联受体的信号转导的关系密切。PAF可引起人单核细胞系U937和MonoMac－1的Tyk2激酶酪氨酸快速磷酸化，PAF激发Tyk2激酶的快速磷酸化同样表现在瞬时转染了人PAF受体和Tyk2激酶cDNAs的COS-7细胞。Tyk2激酶的基因突变显示它的N末端对于结合PAF受体至关重要，一旦激活后，Tyk2激酶即可诱导下游信号传导与转录活化因子（STAT1、STAT2、STAT3和STAT5）的磷酸化。有趣的是PAF受体特异基因缺失而不能与G蛋白偶联时，PAF仍可活化Tyk2激酶和它的下游信号，说明PAF激活Tyk2激酶的活化是G蛋白非依赖的78。
(5)PLD和cPLA2的活化
PLD可水解磷脂酰胆碱产生磷脂酸（PA）和胆碱，PA可被磷酸水解酶进一步水解生成DAG。稳定表达PAF受体的CHO细胞株中，PAF激活PLD依赖于胞外钙离子的内流和PTKs的活化，PAF受体拮抗剂L659,989几乎可完全抑制PAF刺激的PLD的活化79。PAF诱导的PLD的活化还可激活PKCa 80，因为PKCa的活化是DAG依赖的。
胞浆磷脂酶A2（cPLA2）可水解Sn2位含有花生四烯酸的磷脂类物质水解，引起花生四烯酸的释放，促进PAF和PGs等的生成。cPLA2是MAPK的底物，它的Ser-505可被MAPK磷酸化，从而增加其酶活性。PAF引起的cPLA2的磷酸化可被MEK1/MEK2抑制剂PD098059所阻断，而不受p38抑制剂SB203580的影响。在小鼠腹腔巨噬细胞、人中性粒细胞和表达PAF受体的CHO细胞中都可观察到PAF刺激后cPLA2活化，以及AA类物质的释放。但是PAF只能瞬时增加cPLA2的活性，联用CSF-1作为协同激动剂时，可保持cPLA2的Ser-505持续磷酸化，致使钙离子的活化增强和AA类物质的不断生成81。PAF引起的cPLA2的活化亦与PLD的功能有关，在中性粒细胞中PLD水解产物PA和DAG可激活cPLA2促进AA和PAF的生成82，由此可能产生PAF在炎症反应中的正反馈调节，从而加重局部炎症。
四、PAF拮抗剂的研究
文献报道的第一个PAF受体拮抗剂是PAF类似物CV3988,它能很好地抑制PAF对血小板的凝聚作用，但由于口服活性很低，且在高浓度时成为激动剂和具有溶血性，因此其临床应用受到限制83。随后，研究开发出大量的PAF受体拮抗剂，根据其结构和来源基本可分为三大类：(1)PAF结构类似物。主要有依据PAF天然骨架设计的CV3988、CV6209等。 (2)天然化合物。是一些从自然界存在的物质中分离提纯的物质。如从银杏中分离出的萜烯类化合物，如银杏内脂B(BN52021)，从海风藤中提取的海风藤酮，从川芎中提取的川芎嗪等84。 (3)人工合成化合物。主要是天然化合物的衍生物、含有季铵盐的PAF结构类似物和含氮杂环化合物，如MK-287、TCV309、WEB2086、Y24180等。
随着人们对PAF的生理及病理生理更深入的了解，PAF拮抗剂的研究也取得了相应的进展，已有大量具有PAF拮抗作用的化合物进入临床研究。目前正在进行Ⅲ期临床实验的化合物有BN5202185、Y2418086、Lexipafant,处于二期临床研究的化合物较多，如WEB2086、CV3988、TCV309等，它们在抗炎、抗哮喘、抗热休克、抗过敏等方面都发挥一定的作用。
五、展望
近年来,有关PAF在不同脏器组织的病理生理功能、PAF受体以及受体后信号转导方面研究取得了令人瞩目的成果，然而，还有以下问题尚待解决：①PAF在炎症反应中与各种神经递质、细胞因子、粘附分子的关系；②PAF受体是否存在其它种类或亚型，细胞膜与胞内受体结构和功能是否存在不同；③病理状态下，PAF受体的调节机制；④PAF受体拮抗剂的临床合理有效应用。目前，已成功建立起的PAF受体转基因及基因敲除动物模型有助于PAF功能的进一步研究。一些选择性强、效价高、副作用低的PAF拮抗剂的开发，不仅为研究PAF的致病机制，而且在临床治疗、预防疾病方面都具有广阔应用前景。
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