【求助】农杆菌菌落PCR，困惑中。。。
发布于 2009-11-23 · 浏览 1.2 万 · IP 安徽安徽
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小弟最近在做农杆菌（EHA105）侵染烟草，用电转法将构建好的载体（PBI121-目的片段）转入农杆菌。用菌落PCR验证转化是否成功，一开始能P出条带，但划线几次后就P不出来。可是同样的菌落用试剂盒提取出的质粒做PCR则能P出条带。双酶切提出来的质粒，发现切出来的是一片弥散。现在我很困惑，不知道是什么原因。是不是农杆菌不适合做菌落PCR,还有现在的菌能不能往下做侵染。希望大家不吝赐教。谢谢了。
菌落PCR条件：
95℃ 3min
94 45s
65 45s
72 1min 28个循环
72 10min
菌落PCR条件：
95℃ 3min
94 45s
65 45s
72 1min 28个循环
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最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 1.2 万
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