【整理总结】细胞培养—组织块法

组织块培养法

1概述
组织块培养是常用的、简便易行和成功率较高的原代培养方法，即将组织剪切成小块后，接种于培养瓶。培养瓶可根据不同细胞生长的需要做适当处理。例如预先涂以胶原薄层，以利于上皮样细胞等的生长。如果原代细胞准备做组织染色、电镜等检查，可在做原代培养前先在培养瓶内放置小盖玻片，小盖玻片要清洗干净，在消毒前放置，并在放入组织块前预先用1-2滴培养液湿润瓶底，使之固定。组织块法操作简便，部分种类的组织细胞在小块贴壁培养24H后，细胞就从组织块四周游出。但由于在反复剪切和接种过程中对组织块的损伤，并不是每个小块都能长出细胞。组织块法特别适合于组织量少的原代培养，但组织块培养时细胞生长较慢，耗时较长。
2步骤
（1）按照培养细胞取材基本原则和方法取材、修剪，将组织块剪或切成1mm3小块。在剪切过程中，可以适当向组织上滴加1-2滴培养液，以保持湿润。
（2）将剪切好的组织小块，用眼科镊送人培养瓶内。用牙科探针或弯头吸管将组织块在瓶壁上均匀摆置，每小块间距0.5cm左右。量不要多，25ml培养瓶（底面积约为17.5cm2）以20-30小块为宜。如果瓶内有盖玻片，其上也放置几块。组织块放置好后，轻轻将培养瓶翻转，让瓶底朝上，向瓶内注入适量培养液，盖好瓶盖，将培养瓶倾斜放置在37温箱内。
（3）放置2-4h，待组织小块贴附后，将培养瓶慢慢翻转平放，放置培养。这个过程动作要轻巧，让液体缓慢覆盖组织小块。严禁动作过快致使液体产生冲力使粘贴的组织块漂起而造成原代培养失败。若组织块不易贴壁可预先在瓶壁涂薄层血清、胎汁或鼠尾胶原等。
组织块培养也可不用翻转法，即在摆放组织块后，向培养瓶内仅加入少量培养液，以能保持组织块湿润即可。盖好瓶盖，放入温箱培养24h再补加培养液。
3注意事项
组织块接种后1-3d，由于游出细胞数量很少，组织块的粘贴不牢固，在观察和移动过程中药注意动作轻巧，尽量不要引起液体的震荡而产生对组织块的冲击力使其漂起。在原代培养的1-2d内要特别注意观察是否有细菌、霉菌的污染，一旦发现，要及时清除，以防给培养箱内其他细胞带来污染。对原代培养要及时观察，发现细胞游出后要照相记录。原代培养3-5d，需换液一次，去除漂浮的组织块和残留的血细胞，因为已漂浮的组织块和很多细胞破片，含有有毒物质，影响原代细胞的生长，要及时清除。