【求助】求高手朋友帮忙分析一下我的PCR结果

我是用细胞提取的总RNA反转录成cDNA，然后用cDNA扩增了内参和两个目的基因，电泳图从左开始：1-3孔为一个目的基因（900bp，3个退火温度）、4-6孔为一个目的基因（654bp，3个退火温度）、8孔为100bp的marker、9孔为内参基因。PCR的循环数为35个。
问题1：以cDNA为模板，一般用量多少为宜？cDNA反复冻融是否也会降解呢？
2：两个目的基因条带很暗，请问如何调整反应体系能让扩增出的条带比较亮点呢？
求高手朋友帮忙分析，非常感谢。