【原创】TUNEL法检测细胞凋亡成功的经验与失败的教训总结

To 各位研究生同学：
本人用了许多方法检测小鼠的肝脏、脑部、睾丸等组织的细胞凋亡，其中TUNEL做的最多，买的试剂盒主要是roche或promega公司，结果大多数成功，但偶尔也有失败，下面我把实验中的关键问题或我想到的问题与大家共享一下，欢迎高手们多多指教，同时也望能给初学者有所帮忙：
1. 几种细胞凋亡检测方法中TUNEL法的优点和缺点是什么？
2. TUNEL法的实验原理是什么？
3. TUNEL实验中几个关键步骤是什么？
4. 如何减弱非特异性染色？
5. 细胞通透的时间如何选择？
6. 内源性过氧化物酶的封闭时间和封闭液的浓度如何确定？
7. TUNEL反应混合液的孵育时间可以调整吗？
8. DAB的显色时间和条件如何把握？
9. 首次做TUNEL实验的注意事项？
10. PBS浸洗在TUNEL法中的作用和方法分别是什么？
11. 脱蜡和水化在TUNEL法中的作用和方法分别是什么？
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