【原创】激光共聚焦的前期步骤(细胞)

刚刚做过共聚焦,写点东西与大家分享和讨论:
1.做细胞爬片(爬片的步骤就不详述了), 注意: 洗片子的PBS和固定用的4%多聚甲醛一定要新鲜配制的(一周以内的都能用), 因为PBS和4%多聚甲醛放久了后,都会有自发荧光;
2.抗体的孵育: 预实验的时候荧光根据文献和经验设定一、二抗的浓度，一抗4度孵育过夜（时间8－12h）；二抗（荧光抗体）孵育时要避光，孵育好后用PBS充分冲洗；可以将做好的片子直接在板子中孵育，如果从节约的角度来看，可以用12或24孔板比较好；
3。做好以上步骤后，将板子里放点PBS，保存片子湿润，不要干片，这样会影响细胞形态；
4。到激光共聚焦观察室后，再将爬片取出，在干净的载玻片上滴一滴50%的甘油，然后将爬片取出来倒扣在滴过甘油的载玻片上（即细胞在2层玻片之间，一定不要反了哦；还有千万不要用中性树胶封片！）
5。显微镜下观察即可。

其实整个步骤还是蛮简单的，只是做的过程中要小心点，例如不要把爬片细胞面弄反啊之类的啦！大家是怎么做的呢？可以在此讨论一下，看看我做的过程中是否有不妥之处。

希望版主能加分啊，我还没有积分，好多帖子看不了！我在努力将自己的经验与大家一起分享哦！