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核酸基因技术

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丁香园社区核酸基因技术

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医疗行业从业者

1 小时前

测序经常遇到套峰怎么办？手把手教你拆峰（R语言版）教程

在行CRISPR/Cas9系统进行对靶基因敲除，最后均需送sanger测序在DNA水平上进行验证。但是连接好的载体测序，有时却出现套峰，使得我们无法直接判断DNA双链编辑的最终情况。测序结果一条链的成功KO，测序峰图为单峰双峰，导致无法判断另一条链的编辑情况这时候，面临两个选择：第一就是重新再挑单克隆，送测序（多花钱又得多花时间）；第二就是利用工具，对双峰进行拆解，确定另一条链得编辑情况，最终确定CRISPR/Cas9达到敲除编辑。原理很简单，就是其中一条链得编辑情况已经是确定得了，固定确定链得序列，那么，在双峰中就能拆出另一条链得序列，从而确定另一条链得编辑情况。拆峰方法一：利用网页工具拆峰

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22 浏览

医疗行业从业者

15 小时前

实验Protocol|全流程实打实过表达载体构建

在进行对靶基因功能进行操作时，常常需要把靶基因进行gain of function 操作。其中利用的就是通过过表达靶基因，然后看因过表达靶基因后的表型变化来确定靶基因的功能。笔者在网上看了很多教程，质量参差不齐，而且很多教程把简单问题复杂化，比如特别是涉及酶切位点原则时：1.选用载体有的，而靶基因没有的酶切位点；2.选用酶切活性好的，避免标记的酶等等。其实，看完很多网上的教程，仍然一头雾水。现在笔者介绍一个简单、高效、通用的过表达构建。不需要考虑复杂的酶切位点，而且几乎所有靶基因过表达构建通用本教程。克隆过程示意图1. 第一步：选用ligation independent Cloning（LI

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麻醉学其他学科医学生

1 天前

Kasp技术求助

有没有懂的友友能教教我为什么我这个实验失败了，没分出基因型啊

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182 浏览 · 4 讨论

生物是垃圾

药理学医学生

4 天前

关于genotyping的问题，琼脂糖电泳

下面的是cre的，请问第一个样本的条带不够亮，算是带上cre了吗，而且上面跑相应的flox，为什么有的无条带，是不是样本DNA量不够吗

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1033 浏览 · 8 讨论

医师

4 天前

请教Aβ刺激shsy5y造AD细胞模型问题

大家好，本人反复用Aβ25-35刺激SHSY5Y细胞，用的sigma的药，Aβ用双蒸水溶解，也老化了7天，细胞状态也挺好，但每次都不成功，细胞看不到损伤，请教做过这个实验的老师，谢谢，急等。

334 浏览 · 5 讨论

医疗行业从业者

6 天前

藤茶活性成分二氢杨梅素抗腹主动脉瘤新机制：HIF-1α/HO-1轴

主动脉瘤（Abdominal Aortic Aneurysm, AAA）是一种常见而致命的血管疾病，其特点是腹主动脉局部持续扩张，一旦破裂将导致极高的死亡率。尽管手术可以在短期内降低大型瘤体破裂的风险，但对长期生存无明显改善。迄今为止，仍缺乏有效的药物疗法能够阻止AAA的进展和破裂风险。研究人员因此亟需探索新的治疗策略。2025年2月由刘志平（暨南大学药学院、中医药现代化与创新药物发现教育部国际合作实验室、广东省中药药效成分与新药研究重点实验室、生物活性分子与药物性评价国家重点实验室）、王姣姣、黄遵楠（广东医科大学药学院、广东省天然药物研究与开发重点实验室、东莞市计算机辅助药物设计重点实验室、

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1051 浏览

生物菜鸟5555

实验动物学医学生

04-22

求推擅长做RACE技术的公司

做的无参转录组测序，现在需要这个基因的全长去做功能验证，求推荐做race比较成熟的公司

1207 浏览 · 5 讨论

细胞生物学其他学科医学生

04-22

TBE电泳，条带出现异常（疑似空白）为啥呢

红色箭头，条带很宽，中间疑似空白请各位老师看下，这是为啥呢？

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317 浏览 · 1 讨论

临床医学医学生

04-19

假病毒包装

请问园里有没有做过HPV假病毒包装的同学，自己没有做过，也没有查到相关资料，挺着急的，不胜感激！

3760 浏览 · 15 讨论

内分泌学医学生

04-18

PCR产物中间序列缺失

想向各位大佬请教一下，我提RNA逆转为cDNA, 根据cDNA模板设计的引物，预计PCR产物是600bp, 但是实际PCR过后跑胶有三条带（分别是600bp,500bp,400bp）,分别切下来拿去测序，一条600bp的是差不多与模板序列匹配的，但是500bp和400bp左右的条带也能与模板序列匹配，只是中间少了一段序列，是说明还有其他两个中间序列缺失的模板存在吗？还是说是引物或者PCR条件的的问题呢？我想请教一下为什么会出现这种情况呢？请各位大佬指教！感谢！

4050 浏览 · 4 讨论

海狸先生乀

泌尿外科医师

04-18

qPCR CT值太高

请问20ul体系反转录后稀释2倍每孔加5ul CT值太高(>30)怎么办加原液反转录效果会好点吗因为是RNA Pull Down的样本所以RNA量没那么多质量也一般

1193 浏览 · 1 讨论

眼科学医学生

04-18

DNA电泳条带异常

求教大家，DNA凝胶电泳出现这种尖尖的条带可能是什么原因呢？

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1103 浏览 · 1 讨论

内分泌学医学生

04-18

如何得到完整的mRNA序列

目的基因有两个转录本的CDS和cDNA的5端序列完全相同，而且CDS区不是起始密码子开始的，是不是说明这两个转录本的序列并不完整，请问要怎么判断某个转录本的序列是完整的呢？可以用什么方法补齐不完整的测序呢？

3517 浏览 · 8 讨论

内分泌学医学生

04-18

cDNA末端快速扩增-RACE

请问有做过RACE实验的大佬吗？可以请教一下这个实验的成功率高吗？或者有知道哪些公司可以做这个实验的吗？感谢！

1061 浏览

医学检验/实验诊断学医学生

04-18

豪洛捷试剂盒说明书

求助豪洛捷HPV E6/E7mRNA 试剂盒说明书

148 浏览

生物医药资讯

已认证的机构号

04-17

偷偷保存：背着全实验室一次性搞定基因敲减/过表达（送 200 元京东卡）

在基因调控中（如基因过表达、敲低和敲除等），选择适合的病毒载体显得尤为关键，不同的病毒载体（慢病毒、腺病毒、腺相关病毒等）有其独特的性能特点，适用于不同的应用场景。除此之外，如果病毒的存储不当或用量不合适，也可能会导致转染效率低，细胞状态差等情况。比如慢病毒感染效率低，就需要考虑：1、细胞是否适合用慢病毒进行感染？慢病毒适用于大部分细胞系，例如肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞等，但也有一些细胞不适合用慢病毒感染，可能更适合用腺病毒。2、慢病毒是否进行了正确的存储和稀释？如果病毒存储不当或反复冻融会降低病毒滴度/活性。3、感染操作问题MOI 是否合适？感染方法，感染及观察时间是否合适？4、对于一些难感

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于永生吉林

医疗行业从业者

04-17

急需pmirGLO Dual-Luciferase miRNA Target Expression Vector，那位能提供帮助

由于不可控因素，急需载体pmirGLO Dual-Luciferase miRNA Target Expression Vector（货号 E1330），那位能提供，可接受一定范围内有偿提供。谢谢。

301 浏览

职业病科医师

04-17

基因表达水平检测有样本量的要求吗？若有，怎样计算样本量

各位大侠，我的课题是检测观察组和对照组血浆中miRNA-21等4个miRNA的相对表达量，以miR-39为外参，分析miRNA-21在观察组与对照组的相对表达量是否有差别。那么，观察组和对照组各需要多少例，才能达到统计学要求呢？怎样计算所需的样本量呢？谢谢各位。

344 浏览 · 7 讨论

让我睡一会儿

临床医学其他学科医学生

04-16

[求助]DNA多面体合成

用四条DNA链合成一个多面体结构的时候，总量是320bp、440bp左右，但是琼脂糖凝胶电泳跑出来显示在200bp的位置，是形成了二聚体吗？应该怎么改进呢？求大神指点

1200 浏览 · 17 讨论

普通外科学医学生

04-15

大佬们，我打算取人体组织提RNA,请问取完组织需要立即放入液氮中吗？

请问是否有个标准化程序啊？我在考虑是买 RNA later 还是手提液氮罐

4508 浏览 · 7 讨论

眼底病科医师

04-14

【共享】分子克隆实验指南第3版（高清英文版）(molecular_cloning)protocol

本内容需要回复后才能下载！本书版权归作者所有，请于下载后24小时内删除分子克隆实验指南第3版（高清英文版）(molecular_cloning)protocol名称Molecular cloning: a laboratory manual. Vol. 2Molecular Cloning: A Laboratory Manual第第 1 卷卷, David William Russell作者John J. Sambrook, David David William Russell版本3, 插图版出版商CSHL Press, 2001ISBN0879695773, 97808796957

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1.2 万浏览 · 110 讨论

爱吃纸的兔子

04-14

最近在做基因的全长克隆，经过blast，我的全长预计有3000bp，从基因库里调出的序列已经克隆完3＇，但是3＇很短，所以5＇很长，我RACE1是跑的降落pcr，RACE2是跑的巢氏pcr，跑了很多次，比如跑巢氏的时候TM值加2等等，但是就是跑不出来，且一直有个接近2000bp的引物二聚体，求助大家做5＇RACE的经验和跑的程序！

1029 浏览 · 1 讨论

难过的大岩蛇

细胞生物学其他学科医学生

04-12

求问为什么snapgene不显示BamHI的酶切位点?

我的目的片段上面搜索可以搜得到BamHI的识别序列，但是它自己不显示，因为我之前选择酶的时候只看了列表里的酶切位点，没有BamHI，所以我就选了它，然后现在发现里面居然有两个。可是我酶切的结果又是对的（因为我用BamHI切了，但是片段长度还是1300多，并没有被切成了三段小的）到底是怎么回事呀，是我的设置问题，还是这个回文序列在这个片段里面就是不会被BamHI识别?求大神解答，感谢感谢！

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4762 浏览 · 7 讨论

妇科医师

04-11

样本体积小易起泡！如何精准移液，看我一招制服

https://mp.weixin.qq.com/s/78Oemthkcn0tnneoqUhOLQ?sf=1&sr=1&dn=2&nm=wechat

8323 浏览 · 10 讨论

吃饱才有腹肌

医疗行业从业者

04-11

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509 浏览

医疗行业从业者

04-11

空间代谢组学文献1：脂质的空间成像和单细胞RNA测序用于肺癌的早期诊断（准确性超90%

肺癌的死亡率高居恶性肿瘤之首，早期发现是提高肺癌生存率的关键。然而，目前尚无可靠的血液检测手段用于肺癌的早期诊断。2022年2月2日，北京大学人民医院王俊院士团队和北京大学基础医学院尹玉新教授团队合作在《Science Translational Medicine》杂志上在线发表了题为 Lung cancer scRNA-seq and lipidomics reveal aberrant lipid metabolism for early-stage diagnosis 的研究论文，应用单细胞转录组学、血浆脂质组学、机器学习和质谱成像（空间代谢组学）综合分析早期肺癌的脂代谢特征，开发了一套

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391 浏览

銀灰色茫茫海

临床医学其他学科医学生

04-11

求助 marker跑得不太好是什么问题

第一次做琼脂糖凝胶电泳实验然后这个marker看着并不是条条分明难道是因为我们上样的时候晃了一下板子吗。。？但是沉降的应该很快吧应该很快就沉底了吧为什么还会出现条带浮游上去的情况啊有没有类似经历的可以指导一下多谢！

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1341 浏览 · 5 讨论

医学检验/实验诊断学医学生

04-09

同源重组基因编辑

同源重组自带抗性的商业化载体有哪些推荐的呀

321 浏览

生物药物学医学生

04-08

求敲除两个隐秘质粒的Nissle1917?

有没有师兄师姐大佬们有敲除两个隐秘质粒的Nissle1917?有偿求一下，求求帮帮忙

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358 浏览 · 7 讨论

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