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蛋白质和糖学

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论坛首页  >  蛋白质和糖学技术讨论版   >  Western Blot/IP
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【专题讨论】western 内参选择 大讨论 [精华]

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lee800265
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跑_doc
各位高手,我做的是狗的GLUT-4蛋白,很多论文都没用内参,我问了中衫,说没的狗的内参,急死我了,请高手提示在那里能找到?

我也帮你搜索了一下,确实没有看到有抗狗的GLUT-4的抗体,也没有看到与狗有交叉反应的抗体,sorry。但是仍然有如下的几个方法可以试试:
1. 搜索文献,看看有没有类似的引用,这个你手里的文献可能比较多一些;
2. 抗体搜索,找到几乎所有公司的关于GLUT-4的抗体,再分析这些抗体的表位
http://www.biocompare.com/matrix.asp?catid=3194&scid=2&s=Glut4&type=6,69120
在NCBI上比对狗的GLUT-4的氨基酸序列与人类的差异(或者说同源性),然后看抗体针对的表位是否保守,如果这段序列正好一样或者保守,那么再没有其他选择的情况下,可以试试这些抗体的。祝好运!
2007-10-19 10:03
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参与一下
个人觉得,
1.内参最好还是在目的蛋白膜上染
因为,测目的蛋白需要一个标准,那么蛋白测定是第一步,在我们电泳,上样的时候,又是关键的一步,总会有一些技术原因,你上的样量可能会不一致,所以,就需要对这张膜,选择一个标准,我觉得简单的方法就是在同一张膜上既染目的蛋白,又染内参蛋白.如果,两种蛋白分子量相差很大,可以剪开来,单独染抗体;如果相反,则可以先染目的蛋白,然后重新洗膜,封闭,染内参蛋白.
2.关于把两种二抗不同的蛋白同时加一抗,我没有试过,因为担心抗体质量问题,再加上公司不同,抗体之间会有影响,但的确有人这样做,我觉得理论上可能会有犹豫,但实践中是可行的方法.
2007-10-19 11:02
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zhaohongwei1
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  • 38楼
想问下高手们:
用的抗GAPDH单抗是哪个公司的呢?
要做大鼠心肌,查了只有博奥森公司(北京)有
电话咨询了下,说他们家的GAPDH单抗主要适用于人
还劝我再用他们家的B-actin做下
现在着急得很呢
请高手指点
不胜感激!
2007-10-19 13:31
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007ppk
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  • 39楼
一般植物蛋白做Western用什么内参好呢?因为我看到一般的内参只标明应用于动物。
2007-10-19 15:06
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