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【专题讨论】western 内参选择大讨论 [精华]

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丁香园中级站友

36楼

跑_doc
各位高手,我做的是狗的GLUT-4蛋白,很多论文都没用内参,我问了中衫,说没的狗的内参,急死我了,请高手提示在那里能找到?

我也帮你搜索了一下，确实没有看到有抗狗的GLUT-4的抗体，也没有看到与狗有交叉反应的抗体，sorry。但是仍然有如下的几个方法可以试试：
1. 搜索文献，看看有没有类似的引用，这个你手里的文献可能比较多一些；
2. 抗体搜索，找到几乎所有公司的关于GLUT-4的抗体，再分析这些抗体的表位
http://www.biocompare.com/matrix.asp?catid=3194&scid=2&s=Glut4&type=6,69120
在NCBI上比对狗的GLUT-4的氨基酸序列与人类的差异（或者说同源性），然后看抗体针对的表位是否保守，如果这段序列正好一样或者保守，那么再没有其他选择的情况下，可以试试这些抗体的。祝好运！

2007-10-19 10:03

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• 丁香早知道 - 11.15 | 想离开医院去当老师，我爸就跟我断绝父子关系！

woshiaicao

血液科

铁杆站友

37楼

参与一下
个人觉得,
1.内参最好还是在目的蛋白膜上染
因为,测目的蛋白需要一个标准,那么蛋白测定是第一步,在我们电泳,上样的时候,又是关键的一步,总会有一些技术原因,你上的样量可能会不一致,所以,就需要对这张膜,选择一个标准,我觉得简单的方法就是在同一张膜上既染目的蛋白,又染内参蛋白.如果,两种蛋白分子量相差很大,可以剪开来,单独染抗体;如果相反,则可以先染目的蛋白,然后重新洗膜,封闭,染内参蛋白.
2.关于把两种二抗不同的蛋白同时加一抗,我没有试过,因为担心抗体质量问题,再加上公司不同,抗体之间会有影响,但的确有人这样做,我觉得理论上可能会有犹豫,但实践中是可行的方法.

2007-10-19 11:02