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微生物学和寄生虫学

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论坛首页  >  微生物学和寄生虫学讨论版   >  发酵工程
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【交流】 发酵新手，正在成长，请求支援——大肠杆菌发酵工艺放大

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楼主 remmoon
remmoon
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这个帖子发布于12年零321天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
背景：发酵新手，研究生时候没有做过发酵，只是学过相关课程，工作了一年，手上有2-3个基因工程大肠杆菌的发酵放大任务（表达的是酶蛋白），现阶段我们摇瓶实验已经完成，开始做5L发酵罐的摸索，我们计划作高密度发酵，如果不作高密度发酵，也希望优化发酵条件，提高表达的酶活（希望能有2倍以上的提高，不知道是否现实）。计划在6月份完成起码两个菌种5L的发酵条件，然后进行30（50）L放大，年底做到300L放大。
因为实验条件所限制，只有一个发酵罐，两个项目一起摸索，因此对于实验设计更加重要，在以后的时间里，希望得到各位的支持。
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2007-03-08 10:54 浏览 : 13768 回复 : 45
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remmoon 编辑于 2007-03-08 15:31
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楼主 remmoon
remmoon
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  • 2楼
实验现象一、本周作了两个批试验，两个菌种（都是大肠杆菌，暂且称为A，B），没有控制溶氧、pH、消泡，没有控制任何因素，只是想得到最原始的数据，实验现象表明：这两个菌种都是在发酵两小时内溶氧跌0，直到发酵完成就是在负值；发酵过程从开始泡沫就很多，但是到了对数生长后期泡沫自动消除；pH都由刚开始的7下降到5.8左右。A菌种酶活与摇瓶相当，生长与酶活曲线也和摇瓶一致；B酶活只有摇瓶的一半，但是由于实验安排，我们没有做摇瓶的B的生长和酶活曲线，因此下一步会安排这部分工作。
现在我的疑问是：
1.  是不是大肠杆菌发酵溶氧都会很低（不作任何控制的条件下）？我们的现象正常吗
2.  泡沫的表现可不可以是对数生长末期的标志？如果加入消泡剂，对大肠的酶活影响会有多大？（因为看到过有的同志加入消泡剂后，不产酶了）
2007-03-08 10:54
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楼主 remmoon
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  • 3楼
我的计划：由于我对发酵罐不是很了解，所以计划作单因素试验，先学习控制溶氧——偶联转速，以及空气流量，先不补料，但是不知道改变这两个条件，能否把过程中的溶氧控制在20%以上？

对于高密度发酵，在我现有的条件下（最简单的发酵罐，只能检测温度、溶氧、pH，罐压不控制），可以做正交试验吗（人手问题，每周只能做两次发酵）？该怎么设计呢？我最重要的考虑因素是什么？

其实我看了不少这方面的书籍，因此理论方面应该还行，准备阶段其实我的信心很足，但是具体操作起来我感觉思路很乱，希望有经验的前辈给我建议。
2007-03-08 11:02
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楼主 remmoon
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  • 4楼
还有一个问题：
摇瓶试验我们一直都是加amp的，但是现在5L发酵罐我们不知道加amp该如何操作？因为必须要等培养基冷下来加，从接种口加进去不太合适，是不是可以考虑把amp浓度配得稀一些，然后从补料口加进去啊？
2007-03-08 11:29
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