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微生物学和寄生虫学

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论坛首页  >  微生物学和寄生虫学讨论版   >  发酵工程
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【交流】 发酵新手,正在成长,请求支援——大肠杆菌发酵工艺放大

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楼主 remmoon
remmoon
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这个帖子发布于13年零325天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
背景:发酵新手,研究生时候没有做过发酵,只是学过相关课程,工作了一年,手上有2-3个基因工程大肠杆菌的发酵放大任务(表达的是酶蛋白),现阶段我们摇瓶实验已经完成,开始做5L发酵罐的摸索,我们计划作高密度发酵,如果不作高密度发酵,也希望优化发酵条件,提高表达的酶活(希望能有2倍以上的提高,不知道是否现实)。计划在6月份完成起码两个菌种5L的发酵条件,然后进行30(50)L放大,年底做到300L放大。
因为实验条件所限制,只有一个发酵罐,两个项目一起摸索,因此对于实验设计更加重要,在以后的时间里,希望得到各位的支持。
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2007-03-08 10:54 浏览 : 14960 回复 : 45
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remmoon 编辑于 2007-03-08 15:31
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楼主 remmoon
remmoon
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实验现象一、本周作了两个批试验,两个菌种(都是大肠杆菌,暂且称为A,B),没有控制溶氧、pH、消泡,没有控制任何因素,只是想得到最原始的数据,实验现象表明:这两个菌种都是在发酵两小时内溶氧跌0,直到发酵完成就是在负值;发酵过程从开始泡沫就很多,但是到了对数生长后期泡沫自动消除;pH都由刚开始的7下降到5.8左右。A菌种酶活与摇瓶相当,生长与酶活曲线也和摇瓶一致;B酶活只有摇瓶的一半,但是由于实验安排,我们没有做摇瓶的B的生长和酶活曲线,因此下一步会安排这部分工作。
现在我的疑问是:
1.  是不是大肠杆菌发酵溶氧都会很低(不作任何控制的条件下)?我们的现象正常吗
2.  泡沫的表现可不可以是对数生长末期的标志?如果加入消泡剂,对大肠的酶活影响会有多大?(因为看到过有的同志加入消泡剂后,不产酶了)
2007-03-08 10:54
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楼主 remmoon
remmoon
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  • 3楼
我的计划:由于我对发酵罐不是很了解,所以计划作单因素试验,先学习控制溶氧——偶联转速,以及空气流量,先不补料,但是不知道改变这两个条件,能否把过程中的溶氧控制在20%以上?

对于高密度发酵,在我现有的条件下(最简单的发酵罐,只能检测温度、溶氧、pH,罐压不控制),可以做正交试验吗(人手问题,每周只能做两次发酵)?该怎么设计呢?我最重要的考虑因素是什么?

其实我看了不少这方面的书籍,因此理论方面应该还行,准备阶段其实我的信心很足,但是具体操作起来我感觉思路很乱,希望有经验的前辈给我建议。
2007-03-08 11:02
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楼主 remmoon
remmoon
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  • 4楼
还有一个问题:
摇瓶试验我们一直都是加amp的,但是现在5L发酵罐我们不知道加amp该如何操作?因为必须要等培养基冷下来加,从接种口加进去不太合适,是不是可以考虑把amp浓度配得稀一些,然后从补料口加进去啊?
2007-03-08 11:29
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