该话题已被移动 - biosepq , 2006-12-23 13:35
如果您尚不清楚该话题被移动的原因，请参考论坛规则以及本版公告或者联系本版版主。

发帖
每发1个新帖
可以获得0.5个丁当奖励
回帖

【专题讨论】成功过的战友讨论下，你曾经ＷＥＳＴＥＲＮ做不出来是那部分出问题了． [精华]

只看楼主
页码直达：
直达末页

daligirl

常驻站友

106楼

请问楼上的:
"水煮三遍":是在染色液里煮胶吗?每次多长时间,间隔呢?

谢谢!!!

2007-03-13 18:04

投票
收藏 4
打赏
引用
分享
- 微信扫一扫
- 新浪微博
- 丁香客
- 复制网址
举报
- 广告宣传推广
- 政治敏感、违法虚假信息
- 恶意灌水、重复发帖
- 违规侵权、站友争执
- 附件异常、链接失效
- 其他

• 2021协和初审成绩，学博

jp_sjz

内科

铁杆站友

+1 积分
107楼

newhkong2000
大家可以多讨论讨论磷酸化蛋白的WB方法

我贴一个。
做过CREB-p水平检测，与测CREB最大不同之处在于保持CREB的磷酸化状态。我用的细胞裂解液中都含有氟化钠（NaF)和焦磷酸钠(NaPPi2) 两种成分，用来稳定CREB-p。因为检测creb-p的单克隆抗体很可能就是识别CREB与p结合部位的结构的，如果CREB-P在处理过程中降解，最后必然检不出来。
我看过的几个报阴性结果的文献中，其样品处理过程多数没有考虑保护磷酸基，这可能是失败的原因之一吧。
附上相关文献一篇：ZHao LX,Brinton RD.J Neurosci,2003,23(10):4228-4239.

2007-03-14 09:50

投票 1
收藏 1
打赏
引用
分享
- 微信扫一扫
- 新浪微博
- 丁香客
- 复制网址
举报
- 广告宣传推广
- 政治敏感、违法虚假信息
- 恶意灌水、重复发帖
- 违规侵权、站友争执
- 附件异常、链接失效
- 其他

• 上海市2021年2月CPC病例讨论（已揭秘）

沐一

常驻站友

+1 积分
108楼

我也一直在做ＷＢ，体会是一抗最关键！
其实有些蛋白特别是重组蛋白不用纯化一样可以直接上样，用量不宜太多，对照电泳带能看见就行，这样还能避免本底高的问题．如果一抗用单抗，则封闭不宜过长，一抗如果效价不高，可以适当延长反应时间，例如４度过夜．至于二抗和显影都比较常规，只是注意每步要好好洗膜，把非特异降到最低．另外膜也注意步要损伤，否则会影响显影．

2007-03-14 13:33

投票 1
收藏
打赏
引用
分享
- 微信扫一扫
- 新浪微博
- 丁香客
- 复制网址
举报
- 广告宣传推广
- 政治敏感、违法虚假信息
- 恶意灌水、重复发帖
- 违规侵权、站友争执
- 附件异常、链接失效
- 其他

• 用更宏大的视角看待医学——解读大咖宏见

auger

入门站友

109楼

我的蛋白上有biotin，所以我只需要用到可以检测用的avidin就可以了，不用一抗，二抗。问几个很菜的问题：
1. 我想知道使用streptavidin-horseradish peroxidase做chemiluminescence检测的设备是什么？我们实验室只有一个扫描胶用的普通扫描仪，是不是不能用来做chemiluminescence检测？如果不行，有没有什么便宜的解决办法？
2. 请大虾们给推荐一个protocol

2007-03-19 13:23

投票
收藏
打赏
引用
分享
- 微信扫一扫
- 新浪微博
- 丁香客
- 复制网址
举报
- 广告宣传推广
- 政治敏感、违法虚假信息
- 恶意灌水、重复发帖
- 违规侵权、站友争执
- 附件异常、链接失效
- 其他

• 容易漏诊的急诊

蛋白质和糖学

【专题讨论】成功过的战友讨论下，你曾经ＷＥＳＴＥＲＮ做不出来是那部分出问题了． [精华]

提示

丁香园旗下网站

关于丁香园

官方链接

蛋白质和糖学

分享到：

微信扫一扫

【专题讨论】成功过的战友讨论下，你曾经ＷＥＳＴＥＲＮ做不出来是那部分出问题了． [精华]

微信扫一扫

微信扫一扫

微信扫一扫

微信扫一扫

提示

丁香园旗下网站

关于丁香园

官方链接