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铁杆站友

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1271楼

luster888
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如果是表达，那你一定的用高保真的酶了，如果不用，那表达出的蛋白就不是你想要得蛋白。看看invetrogen有没有你要的酶，他的酶是最好的，但是很贵！还有就是没有不具备3-5外切酶活性的高保真酶，之所以叫高保真，就是因为它有这种活性。
我给你一个方法可能管用，不是我做过是我同学这么做过，效果还行，你借鉴一下吧。首先先用高保真的酶P出目的基因，然后再用普通的酶在适宜的条件下温育即可加上AAAAAAAA的尾巴，可以和T载体相连。
不妨试一试，祝好运！

2004-09-15 19:47

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coollya 编辑于 2004-09-15 20:47

• 2019规培考试成绩

紫苏

常驻站友

1272楼

我也想求助一下RT-PCR.我要从脾淋巴细胞中扩一个禽细胞因子.用的是上海华舜的RNA提取试剂盒.我需要的长度是700BP左右,扩了几次出来,但拿出去测序结果都不对.不然就扩不出来.用总RNA在普通的琼脂糖上跑电泳你10分钟时,能看到两条清晰的条带.19分钟只能看到一条清晰的条带,在点样孔较近的条带出出现类似RNA分解样的东西.请各位高手给我分析一下原因好吗.都做两个多月了都还是错的.我都快急死了.

2004-09-17 16:15

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• 丁香早知道-6.18 | 为了学手艺，女医生夜班帮上级老师写病历，却被「骚扰」

bsy236

入门站友

1273楼

To liuchengyuan wrote:

请问用TRIZOL从血清中提取丙肝RNA没有看到沉淀,结果也没有做出来是不是提取的问题啊,还有去除上清仍有少量可不可以烤一烤,温度是多少啊

去除试管底的少量液体时，不必烤，可以再拿去离心一下，再用10或100 ul的枪小心吸取液体（注意不要让枪头接触管壁），然后直接以DEPC 水溶即可

2004-09-17 21:44

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reptile

常驻站友

1274楼

Jennifor
听细胞组的老师讲，他们是把培养液加满带的！
一两天是没问题的，不过要小心污染！

回答基本正确，详见《体外培养的原理与技术》绿皮，精装，作者记不住了

2004-09-18 11:23

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