【原创】western显影常见现象、原因及解决方案 [精华]

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changyan318

入门站友

36楼

我想请教一个问题：
我上了9个样，染膜的时候染的很好，为什么曝光的时候有时总是只有一条或者两条带有荧光，曝光的时候也只能爆出一条或者两条？？？？？？
是一抗或者二抗没孵匀还是什么原因？？？
请多指教！谢谢！！

2006-05-12 10:30

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楼主

yaplewang

丁香园荣誉版主

37楼

可能原因
1 表达本来就有差异，低的不在检测敏感范围之内
2 转膜不均偶发生在半干转膜的中间位置，染膜对比可确认。解决为增厚滤纸（上下各6层）稳定体系
3 孵育不均多发生于膜的周边部分证明：同一样本上同样量的若干孔行后续。解决：用转盘效果会高。若为封口膜水平摇床注意不要封的太死要留足空间使牛奶能够运动并有蛋白的面靠上接触牛奶
4 底物加到膜上铺的不均匀，以及荧光耗竭或不足，不在赘述。

3的可能性还是比较大的。上面几点你都注意一下。同时注意曝光的技巧。

2006-05-13 12:11