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细胞技术

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[求助]Percoll法分离细胞遇到的问题

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楼主 springsong
springsong
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这个帖子发布于14年零330天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我用Percoll密度梯度离心法分离胎盘细胞,但是Percoll的分层总是不好,可以看见在45%Percoll处有胎盘细胞,但是不是呈现一个圆形的盘状,而是呈絮状分布与大约25%-55%Percoll处,而且红细胞不能完全离心到下层,有没有高手指点一下。
另外想了解一下有那些因素会影响细胞在Percoll中的分层,我在制备密度梯度的时候需要注意什么问题呢?
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2006-02-28 00:39 浏览 : 3351 回复 : 12
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jilar
jilar
病理科
铁杆站友

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  • 2楼
我也用过Percoll分离细胞,但不是胎盘细胞。根据我使用时的情况,细胞分层不明显的原因可以有以下几种:
1:细胞数量太少或者过于稀释,我取一只大鼠的颌下腺,一般将细胞稀释成1ml,然后缓慢加到3~4ml的percoll液上。
2:Percoll液配制有问题。
3:离心转数不对。太多或者太少都不会有明显的分层。
4:离心机不合适。甩桶离心机的效果要比角度离心机的效果好很多。
这是我的想法,你参考一下,具体的分离条件还要你自己摸索,文献上记载的未必适合你。
2006-02-28 09:05
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楼主 springsong
springsong
铁杆站友

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  • 3楼
非常感谢!
我还想请教一下红细胞如果发生溶血了是否会影响分层,另外细胞如果太多或者上的液体量太多是否也有影响呢,我是用6ml加到42ml的Percoll液上。
2006-02-28 16:47
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gaoxiaoyan027
gaoxiaoyan027
铁杆站友

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    丁当
  • 4楼
除了jilar提到的外我感觉细胞悬液的制取可能会有问题,我之前做percoll也跟你一样,老是出现絮状即使再大速度离心也不会分层,你可以再检查一下细胞悬液制备步骤有没有不当。你加的液体量应该不算多,至于细胞数量大约几百万/ml,你按比例看看细胞数量是否得当。
2006-02-28 18:20
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