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[话题讨论 2 ] 朊病毒 [精华]

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37楼

icesugar75
Bonus Question: 有没有任何文献证实，分子量处于25KD 和37 KD 的prion 蛋白是具有感染性的蛋白质？---- 依提供文献和论证的有效性，加 2~5 分

谈一谈自己的看法，相关的和不相关的。prion 蛋白由254个氨基酸组成，其分子量应为26－27Kd，但由于prion的180位和196位有糖基化位点可被糖基化修饰，的实际分子量为33Kd左右，用经典的prion 蛋白抗体3F4（Sigma）进行WB可以证实。PrPc和PrPsc的大小都是33Kd，但可以通过蛋白酶K试验进行区分，PrPc进行蛋白酶解后不能被3F4抗体检测到，而PrPsc耐受蛋白酶K的作用。

prion 蛋白的结构已经研究得较清楚，列如下：
1－23aa:信号肽序列
23－90aa:脂筏靶向信号
51－90aa:8肽重复序列（与Cu离子结合部位）
180aa and 196aa:糖基化位点
112－145aa:疏水区
178aa和213aa形成二硫键
231－252aa:GPI锚定信号肽

2003-11-26 23:23

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• （原创）低血糖、低血钠、多尿，高尿糖、酮体阳性？

楼主

icesugar75

丁香园荣誉版主

38楼

谢谢 milkmoon 和 cloner。

我对单独跑胶来判断分子量大小可以，但是，如何知道：

1。它是由原蛋白复制得来的？
2。它仍然保持其模板的感染活性？(cloner 已经解决了这个问题，下面的贴子画红加黑的部分:))

我们在前面的资料中可以看到，朊病毒蛋白的致病形式与非致病形式只是构象不同，是否有这种可能，复制后的蛋白就不具有感染能力了呢？

先把这个问题 hang on 在这里，哪位朋友有了想法或答案定来告知！

icesugar75 wrote:
prion 蛋白由254个氨基酸组成，其分子量应为26－27Kd，但由于prion的180位和196位有糖基化位点可被糖基化修饰，的实际分子量为33Kd左右，用经典的prion 蛋白抗体3F4（Sigma）进行WB可以证实。PrPc和PrPsc的大小都是33Kd，但可以通过蛋白酶K试验进行区分，PrPc进行蛋白酶解后不能被3F4抗体检测到，而PrPsc耐受蛋白酶K的作用。

cloner 的意思是：用一定的抗体可以识别有感染性的朊病毒，而没有感染性的不可被检测，是吗？不知这种说法是否有依据。从实验步骤看来这一步是技术关键。

2003-11-26 23:59

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icesugar75 编辑于 2003-11-28 00:51

• 【心电旋律 27】青年男性心肌梗死背后的真凶！

楼主

icesugar75

丁香园荣誉版主

39楼

我们来看一下图1b：对朊病毒蛋白复制没有影响的一组酶

-- RNase V1：水解双链RNA
-- RNase H：水解 DNA-RNA 中的单链 RNA，对其它类型核酸没有作用
-- DNase: 没有 specify 到底是哪一种
-- EcoRI：降解 DNA 常用酶
-- Apyrase：腺酸水解酶，能将腺三磷酸（ATP）及腺双磷酸（ADP）水解成腺单磷酸（AMP）及无机磷
-- Heparinase III: 肝素酶

前四种酶的使用很好理解，排除了DNA-RNA，dsRNA, DNA 在复制系统中的作用。

用 apyrase 的目的是：排除高能量ATP, ADP 在系统中作用的可能。因为大家都知道，水解核酸时会产生这些小分子，是否这些小分子在系统中起作用，这个考虑很重要。

下面第 5 个过关问题：

使用 Heparinase III 的目的是什么？

BIINUS：3 分

问题提示：heparinase III 能水解什么样的蛋白，为什么要除去这种蛋白在系统中的作用？