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蛋白质和糖学
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蛋白质和糖学技术讨论版
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[求助]细菌全蛋白的提取方法
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panny
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丁当
1楼
这个帖子发布于
14年零81天
前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请教，我想提取细菌的总蛋白然后跑双向，请问细菌蛋白提取该怎么操作？请大侠不吝赐教！
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不知道邀请谁？试试他们
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2005-12-05 23:20
浏览 : 1383
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dongqingli
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2楼
取菌液24hr培养液3ml，应用离心机5000r/min离心5min，弃去上清，保留菌体，用0.5M PBS缓冲液洗涤三次，再加800μl 0.5M PBS缓冲液，再加200μl 10mg/ml的溶菌酶-Tris-HCl缓冲液，冰浴30min，加1ml 0.2mg/ml的DNAase-TE缓冲溶液，25℃水浴10min，离心，弃去上清，保留沉淀，加2ml 0.5M PBS缓冲液，混匀。取菌液于玻片上滴加一滴10%SDS溶液，观察菌液澄清，说明酶裂解完全。
2005-12-07 23:37
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孙学军：磷酸氯喹治疗新冠的可能机制
vszw
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丁当
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3楼
细菌的蛋白非常多，可以归于不同的类，而且我认为分泌蛋白也应该归于细菌总蛋白一类。建议不要用总蛋白直接做二维。总蛋白中的膜蛋白的二维分离条件与一般可溶蛋白很不一样。我也在做这方面的工作，我的思路是分步提，先做分泌蛋白，再做菌体蛋白。菌体蛋白中的膜蛋白也准备分步多种方法提取。具体到提某种蛋白的方法，园子里有很多的贴子，你可以参考一下。
我的看法是不太可能用一种方法将所有的蛋白都跑到二维胶上。
2005-12-10 14:07
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vszw 编辑于 2005-12-10 14:11
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