现发现某个药物可以上调基因A的表达(real time PCR和Western blot已验证),我现在想研究药物是如何上调基因A的表达,请问我下面的科研思路是什么?可以用哪些方法?
不知道邀请谁?试试他们
1. 首先你的qPCR和WB确定了mRNA水平和蛋白水平都上调了,接下来最好确定一下降解过程有没有被抑制,若有一般需要检测泛素蛋白酶体途径有没有受到影响,也可能涉及其他翻译后修饰,若没有就只需要进一步明确药物是怎样上调mRNA水平的;
2. mRNA水平上升可能是由于1)转录水平增强,或者2)mRNA降解减弱。转录水平需要研究该基因潜在转录因子,以及启动子区域甲基化水平等;mRNA降解可能涉及microRNA调控,一般加Dicer抑制剂验证是否有microRNA参与。
感谢zlusklb站友!
可以用药物A处理后,检测基因的表达,确定该基因表达上调后(mRNA水平和蛋白水平),收集样品进行表达谱芯片分析,跟对照比较哪些基因发生变化,分析可能的通路