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PCR技术

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楼主 kevinkim
kevinkim
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    丁当
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这个帖子发布于2年零161天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

在做引物扩增效率验证时，模板由原倍，进行10倍倍比稀释，稀释至10000倍，共5个浓度。内参GAPDH线性非常好，扩增效率为1.01。但扩的两对工作引物Ct值全在22左右，想不明白什么原因啊。下面附上两对引物的融解曲线和qpcr后跑电泳的结果（融解曲线前两个为工作引物，后一个峰为内参，工作引物融解温度在75至80度间）
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2018-09-19 17:14 来自 iPhone/iPad客户端 浏览 : 924 回复 : 3
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楼主 kevinkim
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    丁当
  • 3楼
半山烟雨

溶解曲线单一峰，qPCR电泳仅单一且符合大小的条带，同时扩增效率理想，就行，Ct值全在22左右有什么问题么



可能我表述不太清楚，是我做我的工作引物的扩增效率的时候，五个稀释度的ct值都是22左右。怀疑是污染了，排除了一圈还没弄明白什么污染。
2018-10-06 21:59 来自 iPhone/iPad客户端
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