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请教DNA浓度不够、轻中度降解的情况是否有机会挽救（用于基因测序或分型）

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楼主

姚小明301

老年病科

入门站友

1楼

这个帖子发布于2年零239天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

问题已解决悬赏丁当:20

请教各位老师和同学，是否在操作中遇到很宝贵样本的DNA因浓度不够或者放置时间长导致轻中度降解而低于质控标准（ie. Affy芯片公司要求最低50 ng/ul）的情况下，有知道补救方法的。该技术需要优于华大和北大生科院的技术，如果有前沿文献支持就更好不过，敬请指教，如方法可行必有重谢！

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2018-06-04 01:22 浏览 : 3068 回复 : 6

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iGmd

未知

铁杆站友

2楼

满意答案

NGS的话10ngDNA都可以建库呀，基因组DNA酶切片段化后磁珠法回收，文库构建后15个pcr循环，panel捕获高通量测序用的基本上就够了。按理华大的水平应该是可以的吧，你可能没有问对人。

2018-06-04 14:09

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• 江西吉水被捅的胡医生抢救无效去世了，太悲痛了

学医难救中国人

科室保密

丁香园准中级站友

3楼

是样本本身还是已经提取好的DNA保存不当而降解？

2018-06-04 14:52

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• 误诊病例，等你来参与

IgY_fellow

丁香园准中级站友

4楼

满意答案

你大概是用于建DNA芯片，用于筛选差异性基因吧？是cDNA还是基因组DNA？如果是cDNA，可以考虑再次扩增以提高cDNA浓度；如果是基因组DNA，那么扩增大概是不太合适了，扩增很容易造成基因丰度变化而影响后来差异性基因的检测。如果降解不严重，仅仅是核酸浓度不足，提高浓度可以考虑重新沉淀，超滤等方法；如果发生降解，又必须回收该样品，高浓度乙醇，添加类似AcrylCarrier的核酸助沉剂，或者钙盐沉淀法，可以帮助进一步浓缩DNA。

2018-06-04 22:11

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