各位大侠，小弟最近在做液相的时候遇到一个问题，一时解决不了，故请各位大侠帮忙

问题：在测桑叶水提醇沉上清液中生物碱含量时，发现同一份药液在稀释成不同梯度后所求得的药液原始浓度不一致（以生物碱中的DNJ为评价指标），药液稀释倍数越大，求得的原液浓度也越高！不明白是操作问题还是方法问题，请各位大侠发表高见！

具体表现：将原液取1mL加25%-0.05N HCL水溶液稀释定容至10ML，取10ul做衍生化后滤过， 取续滤液进液相测得的峰面积是59433.500

                 将原液取1mL加25%-0.05N HCL水溶液稀释定容至100ML，取10ul做衍生化后滤过，取续滤液进液相测得的峰面积是23978.900

                 将原液取1mL加25%-0.05N HCL水溶液稀释定容至150ML，取10ul做衍生化后滤过，取续滤液进液相测得的峰面积是20378.391

DNJ标曲梯度：4ug/mL                       峰面积：16543.262

                        8ug/mL                       峰面积：33737.402

                       16ug/mL                      峰面积：62335.641

                       32ug/mL                      峰面积：121914.203

                       48ug/mL                      峰面积：185674.625

                       64ug/mL                      峰面积：250875.703

                       80ug/mL                      峰面积：321713.375

衍生化方法：取10ul样品＋10ul硼酸钾缓冲液（PH=8.5）＋20ul FMOC-CL，涡旋混合后加20℃水浴20min, ＋10ul 甘氨酸＋950ul 0.1%乙酸水溶液

还有

这个方法你的参考文献是哪篇