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临床检验

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2018CLSI 与2017CLSI的不同:更新mCIM和eCIM实验

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楼主 子汉
子汉
检验科

丁香园版主

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这个帖子发布于2年零364天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。

公布了2018CLSI  新版的2018 CLSI M100规则** - 临床检验医学讨论版 -丁香园论坛 http://www.dxy.cn/bbs/topic/38224846

就来讲一讲两者的不同吧

先来讲 检测碳青霉烯酶的表型方法2018版的更新

    一.两种实验的目的(mCIM和eCIM实验)

mCIM用于检测肠杆菌科细菌和铜绿假单胞菌中的碳青霉烯酶,而eCIM是与mCIM联合使用以区分产金属酶和丝氨酸碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌。mCIM可以单独进行实验,但eCIM必须同时和mCIM联合进行实验。仅当mCIM结果呈阳性时,eCIM结果才有效。

二.试剂盒材料

1. TSB肉汤(2ml)

2. 美罗培南纸片(10mg)

3. 1ml和10ml接种环

4. 营养肉汤(如MH、TSB)或生理盐水(3-5ml)

5. MHA平板(100mm或150mm)

6. 美罗培南敏感菌株-大肠埃希菌(ATCC 25922)

7. 0.5M EDTA(仅用于eCIM)

三.mCIM实验操作步骤

1. 取1ul接种环满环(肠杆菌科细菌)或10ul接种环满环(铜绿假单胞菌)的生长于血琼脂平板上的过夜培养纯菌落,于2ml TSB肉汤中;

2. 震荡混匀10-15秒

3. 每管放入一张含10ug美罗培南的无菌纸片,确认纸片浸没于菌悬液中

4. 35℃±2℃大气环境孵育4小时±15分钟

5. 孵育结束时,立即用营养肉汤或生理盐水制备0.5麦氏浊度的大肠埃希ATCC 25922菌悬液(直接菌悬法)

6. 菌悬液制备和平板涂布必须15分钟内完成,干燥3-10分钟;

7. 用10ul接种环将美罗培南纸片从TSB肉汤中取出,将纸片贴于试管内壁,轻轻按压以挤去纸片上多余水分,然后将纸片取出贴于已涂布有大肠埃希菌ATCC25922的MHA平板上。100mm的MHA平板最多贴4张纸片,150mm的MHA平板最多贴8张纸片。

8. 倒置平板,35℃±2℃大气环境孵育18-24小时

9. 量取抑菌圈直径

四.eCIM实验操作步骤

1. 取第二支含2ml TSB的肉汤管,管壁上标记细菌名称;加入20ul 0.5M EDTA溶液于2ml TSB中,EDTA最终浓度为5mM;

2. 剩下步骤同mCIM实验步骤1-9。mCIM和eCIM实验同步进行;

3. mCIM和eCIM实验管中的美罗培南纸片贴于同一块已涂布有大肠埃希菌ATCC 25922的MHA平板上。

五.结果解释之mCIM

1. 碳青霉烯酶阳性:美罗培南抑菌圈直径为6-15mm 或直径为16-18mm但抑菌圈内有散在菌落。若待测株产生碳青霉烯酶,纸片中的美罗培南被该酶降解,结果为无抑菌圈或抑制大肠埃希菌ATCC 25922的活性降低;

2. 碳青霉烯酶阴性:抑菌圈直径≥19mm。若待测菌株不产碳青霉烯酶,纸片中的美罗培南不被水解,仍能抑制大肠埃希菌ATCC 25922的生长;

3. 碳青霉烯酶中性:抑菌圈直径为16-18mm,或直径为≥19mm但抑菌圈内有散在菌落。无法判断是否存在碳青霉烯酶;

图1. 10ul接种环取出美罗培南纸片(a);将纸片贴于试管内壁并挤去多余水分(b);同一接种环取出纸片(c)将纸片贴于已涂布有大肠埃希菌ATCC25922的MHA平板上;

图2a. 阴性对照肺炎克雷伯菌ATCC BAA1706(A)和阳性对照肺炎克雷伯菌ATCCBAA1705(B)

图2b. 碳青霉烯酶产生株。备注:mCIM结果阳性

六.结果解释之eCIM

1. 金属酶阳性:与mCIM结果相比,美罗培南抑菌圈直径≥5mm(如mCIM=6mm,eCIM=15mm,抑菌圈直径之差为9mm)。对于eCIM,忽略任何抑菌圈内的散在针尖样菌落。若待测株产生金属酶,与不含EDTA管相比,该酶活性将被EDTA抑制,纸片中的美罗培南未被细菌产生的金属酶充分水解,美罗培南仍能抑制大肠埃希菌ATCC 25922的生长,进而出现抑菌圈;

2. 金属酶阴性:与mCIM结果相比,美罗培南抑菌圈直径≤4mm(如mCIM=6mm,eCIM=8mm,抑菌圈直径之差为2mm)。对于eCIM,忽略任何抑菌圈内的散在针尖样菌落。若待测株产生丝氨酸碳青霉烯酶,该酶活性将不受EDTA影响。含与不含EDTA管美罗培南的抑菌圈直径无差别或≤4mm。

图3a. mCIM和eCIM结果解释:

A: mCIM阴性(抑菌圈直径=20mm);B:eCIM无效结果;

当mCIM结果为阴性时,不解释eCIM结果,因为碳青霉烯酶检测为阴性。

图3b. mCIM和eCIM结果解释: mCIM和eCIM阳性。

 A:mCIM阳性 (抑菌圈直径为6mm);B:eCIM阳性 (抑菌圈直径 = 15 mm,忽略抑菌圈内有针尖样散在菌落)。

报告:金属酶检测阳性

图3C. mCIM和eCIM结果解释: mCIM和eCIM阳性。

 A:mCIM阳性 (抑菌圈直径为6mm);B:eCIM阳性 (抑菌圈直径 = 19 mm,忽略抑菌圈内有针尖样散在菌落)。 

报告:金属酶检测阳性

图3D. mCIM和eCIM结果解释: mCIM阳性但eCIM阴性。

 A:mCIM阳性 (抑菌圈直径为6mm);B:eCIM阴性 (抑菌圈直径 = 6 mm)。 

报告:丝氨酸碳青霉烯酶检测阳性

七.报告:如下表所示。


仅mCIM

   



mCIM结果          eCIM结果                   报告

   



阴性                       无                     碳青霉烯酶阴性

   



阳性                      无                      碳青霉烯酶阳性

   



中性                       无                       无法判断是否存在碳青霉烯酶,建议实验室讨论;

   



mCIM和eCIM联合实验

   



mCIM结果                     eCIM结果               报告

   



阴性                                不解释             碳青霉烯酶阴性

阳性                                阴性                丝氨酸碳青霉烯酶

   



阳性                               阳性                  金属酶

   



中性                              不解释             无法判断是否存在碳青霉烯酶,建议实验室讨论;

   


八.注释

1. 中性结果:(1)检查待测菌株和大肠埃希菌ATCC 25922的纯度;(2)检查美罗培南的质控结果;(3)重复mCIM和/或eCIM实验;

2. 仅mCIM实验:某些菌株可能出现美罗培南抑菌圈内出现散在菌落,若抑菌圈直径为6-18mm,结果判定为碳青霉烯酶阳性;若抑菌圈直径≥19mm,结果判定为中性结果;

3. 仅eCIM:忽略任何抑菌圈内的散在针尖样菌落。解释结果严格按mCIM和eCIM实验的抑菌圈直径差异进行判断;

4. mCIM阴性但eCIM阳性的结果不应出现。如果出现此种结果,应对质控各环节进行检查,若重复测试结果仍如此,认为实验结果无效;

5. CLSI当前仅对mCIM实验中1 ul满环的肠杆菌科细菌和10 ul满环的铜绿假单胞菌接种菌量进行标准化;

九.质量控制:如下表所示。


质控菌株                                                   细菌特征                                             预期结果

肺炎克雷伯菌ATCC BAA1705      KPC阳性,丝氨酸碳青霉烯酶产生株            mCIM阳性,eCIM阴性

   



肺炎克雷伯菌ATCC BAA1706           碳青霉烯酶阴性株                                        mCIM阴性

   



肺炎克雷伯菌ATCC BAA 2146           NDM阳性,金属酶产生株                      mCIM阳性,eCIM阳性

   



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2018-01-27 21:48 浏览 : 10184 回复 : 2
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