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【求助】Western blot的条带中间淡的几乎断掉（或哑铃状、纺锤状）的样子是什么原因？要怎么改进呢？

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楼主

Linda_dentist

口腔修复科

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1楼

这个帖子发布于3年零120天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

问题已解决悬赏丁当:2

做的是LC3B、p62和Beclin1的WB，但是不管做哪个指标，条带都会呈现中间明显比两头淡，有的几乎看起来像是断掉一般，要调整曝光强度，才勉强连起来，而且就算连起来了也会有明显哑铃状，大家有遇到过这种问题吗？是什么原因？要怎么改进呢？？？

ps：图上是同样的样本上样的，只是从左到右的上样量依次减少，分别为40、35、30、25、20、15、10、5ug

电泳：90v 30min；120v 1h；

转膜：110v 1h；

封闭用碧云天封闭液；

抗体用abcam；

凝胶用10%和12%的

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2017-10-30 16:35 浏览 : 9195 回复 : 12

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Linda339656099 编辑于 2017-10-30 16:40

• 节后焦虑、不想上班？一招帮你找回工作状态！

楼主

Linda_dentist

口腔修复科

入门站友

2楼

电泳：90v 30min；120v 1h；

转膜：110v 1h；

封闭用碧云天封闭液；

抗体用abcam；

2017-10-30 16:37

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美润橙子

病理科

入门站友

3楼

满意答案

1.胶凝固后不均一，分离胶放1.5h

2.样品中有没有杂质

2017-10-30 19:08

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• 2021年取消公立医院编制会不会有进一步动作？最新回复来了

楼主

Linda_dentist

口腔修复科

入门站友

4楼

秋田雨雀
1.胶凝固后不均一，分离胶放1.5h
2.样品中有没有杂质

样品我是裂解后4度孵育40min，之后4度 12000g 离心5min，然后取上清液，加Loading buffer后煮沸，分装后-80度保存。。

2017-10-30 20:38

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