【日更】大鼠胎鼠神经干细胞悬浮培养情况(借此发现自己实验的问题并分享经验)
【背景】第一次养神经干,讨到了三管冻存的P2代神经球,试着自己培养。第一管……恩算是练手了,本直播从第二管开始! 立贴求保佑神经干成球增殖保佑保佑!
【立贴目的】分享交流培养经验(作为一名小白,更多希望能向有经验的前辈们请教,改进自己的protocol。也希望自己的失败经验能帮到后人。本贴争取每日更新~~~~欢迎批评、指教、咨询、分享。但是请勿把本帖作为Protocol!!
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【细胞信息】大鼠14.5天胎鼠的大脑组织
【培养基配方】——维持干性
Gibco 21103049 neurbasal培养基
Gibco 12587010 B27 minus VitA 2%
Gibco 35050061 Glutamax 1%
Peprotech 400-29 Recombinant Rat FGF-basic 10-20 ng/ml
Peprotech 400-25 Recombinant Rat EGF-basic 10-20 ng/ml
Gibco 15140-122 青霉素链霉素 1%
(可选)Heparin 5ug/ml(这个我第一次加过一次,感觉没啥效果,据说是为了延长因子的寿命,反正请教过很多人,也有不少说不加的,所以我就没加)
【培养容器】
NEST untreated 6孔板
这个吧,因为之前用TC处理的瓶子、皿、板都发生了贴壁的问题,所以费尽功夫找到了untreated的培养容器,效果怎么样还不知道,过几天应该就能有结果。
【培养方式】
悬浮培养…………不能贴壁,贴壁了就不增殖了。。。
——————————————以上为基本信息,下一贴说第一天的故事(今天)——————————————