各位朋友、老师好，我现在做种多肽类药物分离纯化分析这块儿工作。

想请教一下大家：我现在用的HPLC洗脱方法走出来的图谱，主峰在8min出来，但是分离度总是0.95左右，摸索过了四种洗脱方法，主峰洗脱出来的时间从8min到20多min都试过了，但是分离度最大不超过1.0X。而且拖尾因子也比较大2.2X左右。我用的样品的纯度已经达到了99.4%左右，紧挨着主峰的附近有两个含量很小的杂质峰，但是分离度根本达不到药典规定的分离度>1.5的要求，想请教一下大家几个问题：

1、想增加分离度需要改进那些地方？我用的是水-乙腈再加上TFA作为流动相走梯度洗脱样品的；

2、因为药典上是对化药规定的分离度要大于1.5，对于多肽类药物的话这个适用么？

3、如果想提高分离度，减小拖尾因子需要采取哪些方法？

4、有对多肽、蛋白类药物的HPLC检测的一些参数（例如分离度、拖尾因子、纯度角、纯度阈值）等研究的文献么？我百度查到的都是对蛋白分离纯化大范围的概述，没有比较细的研究。

希望能得到大家的指导，谢谢！     

感谢你的回复。

我使用的是C8的色谱柱，用过C18的色谱柱，但是保留时间太长，牵扯到工业生产效率太低。拖尾主要是主峰后面有个杂质峰跟主峰挨的太近，导致拖尾因子太大。。但是目前的设备分离纯化乙腈到达极限了，看来不行得买新的设备填料了。。。药典上说的分离度不是建立在化药的基础上的么？我搜索其他一些多肽类药物，他们在检测方法中没有体现分离度和拖尾因子的大小，这是什么情况？谢谢！