刘小灼楼主,我最近也在做MSU晶体对RAW264.7的实验,MSU购自SIGMA,用PBS配置的,用前超声。但是加到细胞里面后发现,MSU好多都呈黑的团块状,比细胞还大,而且浓度达到500ug/ml处理18h,细胞都死光了,请问你有碰到这些问题吗,怎么解决的啊?
你好,我也在做这个,加qq一起交流下吧,1156698773
刘小灼 楼主,我最近也在做MSU晶体对RAW264.7的实验,MSU购自SIGMA,用PBS配置的,用前超声。但是加到细胞里面后发现,MSU好多都呈黑的团块状,比细胞还大,而且浓度达到500ug/ml处理18h,细胞都死光了,请问你有碰到这些问题吗,怎么解决的啊?
我的RAW的半数致死量在1mg/mL左右,sigma好似不生产晶体的MSU了啊,都是些块状的,我自己做的那些也有黑色团块,看起来是那些粒径太小的晶体自己聚集起来了;
根据本贴另外一位答主的回复,原来RAW是做不了这个模型的
x7758414首先你想做炎症小体,不能使用RAW细胞,因为没有ASC蛋白无法形成NLRP3炎症小体,其次,做NLRP3炎症小体激活需要用LPS作为第一信号Prime细胞3小时以上以后,再把MSU作为第二信号加进去,至少处理3小时,才会有IL-1b的释放,细胞系可以用THP-1用PMA活化,原代细胞可以用BMDM和PM
首先你想做炎症小体,不能使用RAW细胞,因为没有ASC蛋白无法形成NLRP3炎症小体,其次,做NLRP3炎症小体激活需要用LPS作为第一信号Prime细胞3小时以上以后,再把MSU作为第二信号加进去,至少处理3小时,才会有IL-1b的释放,细胞系可以用THP-1用PMA活化,原代细胞可以用BMDM和PM
老师,您确定RAW没有炎症小体吗?不是炎症小体在很多种细胞中都存在吗?