如何做好小鼠气管平滑肌细胞的原代培养
恳请各位大侠驻足停留片刻:
小生现在从事的课题需要提取小鼠气管平滑肌细胞并进行原代培养,我所采用的是组织块贴壁培养法,步骤如下:1、将分离的气管段放入含有100U/ml双抗的D-Hanks液中;2、转入超净台去除血污和多余结缔组织;3、纵行剖开气管,小心刮除外膜与内膜;4、用眼科剪将气管剪成1*1mm(我技术不佳,估计会大一些)的小组织块按顺序贴在6cm的培养皿底,然后放置在37度,5%CO2孵育箱中;5、约3小时后待组织块干涸后加入20%FBS 2ml浸润组织块;6、静置3天后再加入3ml同浓度培养液(即总共5ml);7、第6天全部换液,此后每3天换一次培养液。
我是2月17日获取的气管组织块,今天已经是第11天,镜下观察只有两三个组织块周围长出了细胞,索性细胞居多,也有圆形,但量很少,其他组织块周围压根没有细胞长出,而且请同门师姐帮忙看细胞的时候获得的信息是细胞有停止生长的迹象。呜呼!该咋办?所以恳请有经验的各位大侠能提供一些培养该细胞的方法和技巧,不胜感激!















































