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蛋白质和糖学

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论坛首页  >  蛋白质和糖学技术讨论版   >  蛋白质组学
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开贴回复质谱-蛋白质组学相关问题

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楼主 青木书生
青木书生
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这个帖子发布于4年零73天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。


质谱-蛋白质组学应用

蛋白质组学本质上指的是在大规模水平上研究蛋白质的特征,包括蛋白质的表达水平(Increased or decreased levels in different groups),翻译后的修饰(Post-translational modifications,PTM,磷酸化,泛素化等),蛋白与蛋白相互作用(Protein-protein interaction)等,由此获得蛋白质水平上的关于疾病发生,细胞代谢等过程的整体而全面的认识。随着近年来超高分辨质量分析器,Orbitrap(静电场轨道阱)的面世,使质谱在更为宽松的环境条件下保持高度的稳定性而将蛋白组学的发展持续推进。Orbitrap腔体体积小能保持真空度高,上游的C trap组件又能够很好的帮助肽段离子继续到更高的浓度,从而使MS仪器的分辨率提高产出的二级碎片质谱信息(MS/MS)更加的丰富和清晰。根据官方的数据统计,CNS系列刊物中涉及到Orbitrap MS技术的论文数量已经达到2-3篇/天的惊人数量,也体现了科学界对质谱MS用于生物医学研究稳定性和可靠性的认可。

相关链接:

Orbitrap的过去、现在和未来: http://wiki.antpedia.com/rbitrapdeguoquxianzaiheweilai-346181-news

Orbitrap LC-MS   http://www.thermofisher.com/cn/zh/home/industrial/mass-spectrometry/liquid-chromatography-mass-spectrometry-lc-ms/lc-ms-systems/orbitrap-lc-ms.html

 


六楼留了信息,gaobieDXY

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2016-11-11 14:46 浏览 : 30760 回复 : 134
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青木书生 编辑于 2019-08-23 13:51
  • • 【讨论】游离腕横纹皮瓣
楼主 青木书生
青木书生
肿瘤综合科
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持续更新ing......................................因为楼主想到什么就写什么,有错别字和语句不顺的地方一定多包涵。


HPLC-MS/MS的应用:

1.未知相互作用蛋白ID的鉴定 (蛋白信息鉴定)

IP-ID,GST-pull down等等,常见的分析蛋白质互作的实验,也能用于检测纯化蛋白的质量和杂质。

此处tips: .注意常见污染物(kertin)的影响,尤其是银染胶条样品。.HSP热休克蛋白,常见于异源表达的真核纯化蛋白样品中,且含量较高,比如在E.coli中表达的人源纯化蛋白,HSP是常见的辅助折叠蛋白。因此研究此类型蛋白时需充分沟通方法信息。.注意酶解条件,组蛋白判断是否需要衍生化。重要肽段信息是否需要非胰酶条件参与。.冷门生物样品,需要尽量扩大数据库内容,方便或得更多信息。细菌类样品同样需要注意酶解条件。

此外,CX-link技术和二硫键鉴定也可以通过软件计算获取蛋白的相应结构信息。氢氘交换质谱技术(HDX -MS)用于药物表征蛋白结构方面的研究也在日渐兴起。

2. PTM 蛋白翻译后修饰位点鉴定(磷酸化,泛素化位点鉴定)

 

3. 蛋白分子量鉴定(单抗,单抗-化药偶联物的鉴定)

 

4. 蛋白质定量研究

 

质谱前定量  2D-gel

 

一级质谱定量 SILAC, ICAT

 

二级质谱定量 iTRAQ,TMT

 

5.进阶:

 

多维分离HPLC技术研发

 

MUDPIT

 

靶向蛋白质组学

 

MRM/SRM

 

PRM

 

SWATH/DIA



 

2016-11-11 14:52
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青木书生 编辑于 2019-01-14 17:09
  • • 患者家属撕心裂肺的一跪让我深思许久,记录一下规培生涯里遇到的一些人、一些事
蓝魂1205407213
蓝魂1205407213
入门站友

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我有问题想向您请教下,

1、质谱检测后的数据protein score、peptide score和eMPAI是怎么计算得来的?

2、各自又有什么含义呢?也就是说我判断鉴定到这个蛋白是否可信是以什么标准呢?如果说按照上面三个,打分越高可信度越高,但是三个之前不是同一趋向性时应该怎么判断?

3、以您的经验来看质谱鉴定的假阳性概率是多少?怎么去辨别分析假阳性结果

4、2D-gel相比现在的技术的优势在哪里?

5、MRM和PRM本质的区别在哪里?

问题有点多,这是我一直有疑问的问题,中间自己查了,但是还是觉得一知半解,希望大神帮忙解惑。谢谢!

2016-11-11 15:11
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生物星
生物星
入门站友

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赤裸裸的地吽啊

2016-11-11 19:21
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