大家好，我想请教一个关于石蜡包埋切片的问题：

    我做了两次小鼠大脑海马部位全脑包埋，包埋的脱水时间75 95 100醇各两次，每次半小时。二甲苯透明不到20min（因为害怕透明太过），石蜡共两道每道1小时。石蜡的温度在60度左右。切片时切的片子是卷曲的。放到39度水中展开时，没等展开组织就分开了，碎了。有时候也能切到好的片子，仅仅最开始一张或者两张，但是组织还是易碎。我看同学切的也是卷曲的片子 但是他们的能展开。是不是因为二甲嫩透明的时间不够 或者石蜡浸泡的时间不够呢？

我试着用这个片子染色 GFAP能染出来，但是其他蛋白就染不出来了。

还有就是我在抗原修复的这一步，片子特别容易脱片，我的修复液是枸橼酸修复液 10x的，配液的时候PH调了6.但是稀释到1X时PH变成了6.54.这种情况是不是需要再把1x的修改液PH调到6呢？但是其他人用的时候直接稀释液没有测PH，也能做出来。

还有就是一抗4度过夜之后需要复温半小时吗？还是拿出来了之后就洗呢？

问题有点多，谢谢大家！

急求解答！

1、一般脑组织取材过后20分钟的二甲苯够够的了！如果切片到水中展开直接弥散开的话可能是包埋的蜡块里混有二甲苯，在水中一展就全散开了！脑切片如果修复时掉片绝大部分原因是蜡块制作时脱水不够，粘附玻片疏水导致组织贴附不紧密就会掉片！   你下次可以先取海马部位（组织不要太大厚度5mm）70%1小时、80%1小时、95%2道各半小时、95%II半小时、100%酒精2道各半小时、50%酒精+50%二甲苯10分钟、二甲苯2道各10分钟、石蜡3道各半小时。
2、最好调下PH至6.0不要在意复杂，要想做好不能省的
3、一般复温15分钟就够了，如果温差不到复温就可以省的
纯属个人简介，仅供参考