过去几十年，国内外学者在十足目甲壳动物的转基因研究方面开展了大量工作，但一直没有突破虾类转基因研究的技术“瓶颈”。

本人指导的2013级硕士研究生桂天书同学以脊尾白虾为研究对象，解决了脊尾白虾受精卵显微注射中存在的诸多难题，成功搭建起脊尾白虾受精卵显微注射平台；实现了体外转录绿色荧光蛋白EGFPmRNA在脊尾白虾胚胎中的表达；以脊尾白虾几丁质酶4基因（EcChi4）为靶标基因，利用CRISPR/Cas9技术对EcChi4第四个外显子的一段靶序列进行了敲除，结果大约50%的存活仔虾在对应靶向位点发生了indels突变；从众多的突变体中筛选出EcChi4对应靶向位点缺失5个碱基（靶标基因发生移码突变）的嵌合体，进而利用遗传学手段获得了稳定遗传的脊尾白虾EcChi4基因敲除模型。目前该基因敲除模型已经培育至第三代（G3）。该研究对深入开展十足目甲壳动物重要功能基因的研究及转基因育种均具有重要的理论意义和实践意义。

这是国内外首次在十足目动物中实现了基因编辑工作，由于脊尾白虾有多个几丁质酶基因，所以EcChi4的敲除后代并未出现明显的表型差异，因此该研究最后只能发表在G3: Genes, Genomes, Genetics上。该研究得到了国家自然科学基金和“863”课题的资助。

原文链接：

http://www.g3journal.org/content/early/2016/09/06/g3.116.034082.full.pdf+html

GuiTianshu, Zhang Jiquan*, Song Fengge, Sun Yuying, Xie Shijun, Yu Kuijie, Xiang Jianhai.CRISPR/Cas9-Mediated Genome Editing and Mutagenesis of EcChi4 in Exopalaemoncarinicauda. Early Online September 7, 2016, doi: 10.1534/g3.116.034082

询问一下，脊尾白虾受精卵一细胞期时间维持多久，还有你们如何获得一细胞期时间，是查文献还是自己实验，谢谢！