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蛋白质和糖学

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论坛首页  >  蛋白质和糖学技术讨论版
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请教:蛋白浓缩方法 [精华]

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liuhuizr
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lovelydoudou
请问,跑sdspage的话,硫酸铵需要除去么?我的样品体积很小,再除硫酸铵的话怕剩不下多少了。能否将沉淀直接加入样品缓冲液-沸水浴5分钟-电泳?

硫酸铵最好除去,不然它会影响电泳,我原来跑SDS-PAGE的时候不除盐,结果电泳很慢,各加样孔的样品跑的有快有慢,而且跑出的条带弥散,将样品脱盐后就好了:)
2008-06-08 16:22
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gys_706
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war3
如果你的上清液体积很小,例如只有100-200ml那么可以用amicon ultra-15,这种浓缩管一次上样15ml,多做几次就可以了,如果体积很大,例如1L-2L,建议你用viva flow,这种浓缩装置很不错的,而且效果也很不错,可以选择不同截留分子量的膜。最近一直在用觉得很不错向你推荐。

你好,我浓缩后,测了一下浓度,大约在1-2ug/ul,加入丙酮沉淀液,没有沉淀出来,不知道怎么回事?
2011-09-04 14:12
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小傲傲
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蛋白用PEG浓缩后,形成的沉淀溶解性很差,怎样去除PEG,谢谢
2012-11-28 12:52
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mydream_520
(一)透析袋浓缩法
利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子(6 000-12 000)聚合物如聚乙二醇(碳蜡)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂配成30%-40%浓度的溶液,将装有蛋白液的透析袋放入即可。吸水剂用过后,可放入温箱中烘干或自然干燥后,仍可再用。
(二)冷冻干燥浓缩法
这是浓缩蛋白质的一种较好的办法,它既使蛋白质不易变性,又保持蛋白质中固有的成分。它是在冰冻状态下直接升华去除水分。具体做法是将蛋白液在低温下冰冻,然后移置干燥器内(干燥器内装有干燥剂,如NaOH、CaCl2和硅胶等)。密闭,迅速抽空,并维持在抽空状态。数小时后即可获得含有蛋白的干燥粉末。干燥后的蛋白质保存方便,应用时可配成任意浓度使用。也可采用冻干机进行冷冻干燥。
(三)吹干浓缩法
将蛋白溶液装入透析袋内,放在电风扇下吹。此法简单,但速度慢,且温度不能过高,最好不要超过15℃。
(四)超滤膜浓缩法
此法是利用微孔纤维素膜通过高压将水分滤出,而蛋白质存留于膜上达到浓缩目的。有两种方法进行浓缩:一种是用醋酸纤维素膜装入高压过滤器内,在不断搅拌之下过滤;另一种是将蛋白液装入透析袋内置于真空干燥器的通风口上,负压抽气,而使袋内液体渗出。
(五)凝胶浓缩法
选用孔径较小的凝胶,如SephadexG25或G50,将凝胶直接加入蛋白溶液中。根据干胶的吸水量和蛋白液需浓缩的倍数而称取所需的干胶量。放入冰箱内,凝胶粒子吸水后,通过离心除去。
(六)浓缩胶浓缩法
浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物,具有很强的吸水性能。每克干胶可吸水120ml~150ml。它能吸收低分子量的物质,如水、葡萄糖、蔗糖、无机盐等,适宜浓缩10 000分子量以上的生物大分子物质。浓缩后,蛋白质的回收率可达80%~90%。比浓缩胶应用方便,直接加入被浓缩的溶液中即可。必须注意,浓缩溶液的pH值应大于被浓缩物质的等电点,否则在浓缩胶表面产生阳离子交换,影响浓缩物质的回收率。

这些都是常用的蛋白浓缩方法,你可以系统参考学习下,但要适用到你的实验要求里,不仅要浓缩蛋白还要除去小分子蛋白,但我不知道你所说的小分子蛋白是多大分子量的?小于20KD的可以选择0.45um的透析袋除去,挺便宜也很好用,但稍微大点的话,恐怕就不行了,这时恐怕用商品化的超滤管才是有效的方法,虽然贵点,但效果比较好,但它还要求离心机的转速能够达到150000RPM以上为好,祝顺利
你好,你的帖子里提到,冷冻干燥方法提取蛋白后形成粉末,这样保存方便,想咨询一下粉末放在4°还是-20°比较好?可以保存多久?
2013-03-05 13:02
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