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植物与农林科学

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求教一个关于基因编辑技术CRISPR/Cas9的问题

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楼主

常驻站友

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1楼

这个帖子发布于4年零168天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

各位研究基因编辑技术的大神，小弟看文献一直有个困惑。目前CRISPR/Cas9通过NHEJ途径在基因敲除方面的应用已非常成熟，但是通过HDR途径实现基因敲入和替换的报道较少。且目前的文献报道说要想实现HDR途径，需将SgRNA-Cas9载体和一个修复模板载体（donor）共转化。利用农杆菌介导的共转化在很多植物物种中是很困难的，效率非常低，为什么不能将SgRNA-Cas9载体和供体修复模板整合在同一个载体上，这样更能提高转化效率呢？小弟第一次发帖，望高手们不吝赐教，提供相关的文献也可。非常感谢！

版主donggua留言:
希望能有更过有意义的讨论，期待。加分鼓励！

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2016-09-19 19:44 浏览 : 6975 回复 : 7

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donggua 编辑于 2016-09-22 07:49

• 腹腔镜术中「钓鱼法」上提子宫技巧（视频）

常驻站友

+1 积分
2楼

这种整合到一起的载体非常多，适用于转基因工作。技术研发的时候，往往是瞬时表达，方便检测目的基因是否编辑成功，这个时候分别用不同的载体，可以降低工作量，另外瞬时表达的载体往往不能超过10kb。技术研发成功之后需要进一步转基因，这个时候就需要整合到同一个载体，这种载体往往10kb以上。类似的文献也有的

2016-09-20 08:12 来自 iPhone/iPad客户端

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• 本周议题：你的科研压力都来自哪里？

楼主

常驻站友

3楼

朋友，谢谢你的回答。那在你的研究中有没有涉及到CRISPR/Cas9系统在植物中的应用，是否有利用一个载体同时携带sgRNA，Cas9及供体修复模板在植物中实现基因定点敲入或替换的成功经验？

2016-09-20 19:14

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常驻站友

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4楼

目前在植物中实现HDR途径修复是很难的，一般认为，增加供体模板的量可以提高重组率，而农杆菌转化方法中进入细胞的载体片段拷贝数很低，几乎可以忽略，从这一点看，基因*方法可能更适用于这个目的，那么供体模板与sgRNA-Cas载体在不在一起都没有关系了。

2016-09-21 13:44

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